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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?
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crazymouse66

金虫 (正式写手)

[求助] 请问做普通PCR要用多大浓度的DNA?

各位虫友好，我现在是提取了土壤的总DNA， 然后想做个普通PCR。请问大家，一般做普通PCR的时候，DNA一般用多大的浓度呢？或者说在多大范围内的浓度比较好呢？谢谢大家。因为我提的DNA的量比较少，所以想把DNA浓度稀释一下再用，目前的DNA浓度大约在100-200ng/ul 吧，请问稀释后还能用吗？谢谢大家。
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1楼2013-11-28 09:56:10
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ningning915

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发贴积极交流。 2013-11-28 10:22:05
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊，谢谢大家的帮助，谢谢！ 2013-11-28 10:55:49
做pcr，模板浓度不用太高，过高还会出现拖带，你可以吸1ul，稀释50倍，做模板，应该差不多，我一般都是稀释50倍的。
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2楼2013-11-28 10:10:48
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crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ningning915 at 2013-11-28 10:10:48
做pcr，模板浓度不用太高，过高还会出现拖带，你可以吸1ul，稀释50倍，做模板，应该差不多，我一般都是稀释50倍的。

请问你的稀释50倍所用DNA的初始浓度大概是多少呢？
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3楼2013-11-28 10:24:20
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
10-50ng/ul，30循环就足够了吧
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jiayoubashaonian
4楼2013-11-28 10:30:40
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-28 10:48:20
crazymouse66: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊，十分感谢大家的帮助，谢谢。 2013-11-28 10:55:15
这个还真不好回答，一般模板越纯，需要的越少，PLASMID一个NG都可以，TOTAL DNA 要多些，如果你的DNA的量比较少，可以少加，增加循环数
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5楼2013-11-28 10:33:59
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crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zh10246 at 2013-11-28 10:33:59
这个还真不好回答，一般模板越纯，需要的越少，PLASMID一个NG都可以，TOTAL DNA 要多些，如果你的DNA的量比较少，可以少加，增加循环数

请问我大概稀释成10ng/ul 的浓度可以吗？我以前用这个浓度的DNA做过realtime PCR。
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6楼2013-11-28 10:47:15
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crazymouse66

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by blackrose8089 at 2013-11-28 10:30:40
10-50ng/ul，30循环就足够了吧

那我就大概稀释成10ng/ul 左右吧，因为以前用这个浓度做过realtime PCR，请问可以吗？
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7楼2013-11-28 10:49:01
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zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
crazymouse66: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 好吧，谢谢啊，哈哈。十分感谢大家的帮助。 2013-11-28 10:54:38
引用回帖:
7楼: Originally posted by crazymouse66 at 2013-11-28 10:49:01
那我就大概稀释成10ng/ul 左右吧，因为以前用这个浓度做过realtime PCR，请问可以吗？...

你试试看吧，可以从10ng/ul 开始，不行再调整，最后实验结果说话
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8楼2013-11-28 10:52:25
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ningning915

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by crazymouse66 at 2013-11-28 10:24:20
请问你的稀释50倍所用DNA的初始浓度大概是多少呢？...

就是提的质粒，跟你的浓度应该差不多，或者你直接吸一点，我们老板说他以前就点一下都能做出来，还很亮。
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9楼2013-11-28 11:24:19
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by crazymouse66 at 2013-11-28 10:49:01
那我就大概稀释成10ng/ul 左右吧，因为以前用这个浓度做过realtime PCR，请问可以吗？...

可以的，楼主也可以加大循环数
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jiayoubashaonian
10楼2013-11-28 13:41:12
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