应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB实验问题求助
101/1返回列表
查看: 1907  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

baiwei57

金虫 (正式写手)

[求助] WB实验问题求助

组蛋白H3荧光信号很强，但是曝光H3K9二甲基化位点和H3K4甲基化却无荧光，上样量及实验条件完全一致，请问什么原因？如何改进？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
好好过每一天
1楼 2013-11-26 18:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

woai43

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 12:38:34
gyesang: 回帖置顶 2013-11-27 12:38:35
baiwei57: 金币+2 2013-11-28 12:17:27
H3K9me2和H3K4me相对H3丰度低，估计是抗体的问题。如果有人工合成的带有H3K9me2修饰的histone tail，建议做个dot blot ，确定抗体是否能够识别这一修饰。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-11-27 11:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

953162729

铜虫 (初入文坛)
不知道啊
回复此楼
············
2楼2013-11-26 18:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

953162729

铜虫 (初入文坛)
3楼2013-11-26 18:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lovebirdshs

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-26 19:14:17
baiwei57: 金币+2, ★有帮助 2013-11-26 20:08:26
甲基化后造成蛋白空间结构改变，结合基团被包埋导致曝光失败，这个以前遇到过的   也不是所有蛋白修饰后都会这样   运气比较差而已
赞一下 回复此楼
孤独的舞者
4楼2013-11-26 18:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)
？跑电泳之前不是煮沸变性了吗，蛋白空间结构应该打开了呀，我看文献做的是小鼠肾脏，还有心脏的组蛋白H3的甲基化修饰都曝出来了
赞一下 回复此楼
实验虐我千百遍，我待实验如初恋
5楼2013-11-26 19:33:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by woai43 at 2013-11-27 11:11:57
H3K9me2和H3K4me相对H3丰度低，估计是抗体的问题。如果有人工合成的带有H3K9me2修饰的histone tail，建议做个dot blot ，确定抗体是否能够识别这一修饰。

抗体是一家公司（CST）的，同时买的，抗体说明书上的WB图片条带很清晰
赞一下 回复此楼
实验虐我千百遍，我待实验如初恋
7楼2013-11-27 15:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woai43

金虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-29 14:15:13
引用回帖:
7楼: Originally posted by tupeipei at 2013-11-27 15:37:03
抗体是一家公司（CST）的，同时买的，抗体说明书上的WB图片条带很清晰...

抗体说明书的WB样品跟你的实验样品是否是一类样品，WB上样的量，H3K9me2修饰的丰度，提取方法都可能不相同。同一家公司的不同抗体未必都是好的，现在是你抗出来没有信号，首先就应该排除抗体不好的因素，如果你认为抗体是没有问题的，那可能就只能从提高loading量上入手了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-11-27 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shawn2006

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
baiwei57: 金币+2 2013-11-29 11:18:27
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-29 14:15:04
本帖内容被屏蔽
9楼2013-11-29 00:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)
呵呵，已经做出来了，一抗从室温2h改成4度过夜就暴出来了
赞一下 回复此楼
实验虐我千百遍，我待实验如初恋
10楼2014-04-14 21:47:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baiwei57 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 323求调剂 +3 洼小桶 2026-03-18 3/150 2026-03-20 22:54 by JourneyLucky
[考研] 316求调剂 +5 梁茜雯 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:26 by 你好你好666
[考研] 295复试调剂 +8 简木ChuFront 2026-03-19 8/400 2026-03-20 20:44 by zhukairuo
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 0856调剂，是学校就去 +8 sllhht 2026-03-19 9/450 2026-03-20 14:25 by 无懈可击111
[考研] 085410人工智能专硕317求调剂（0854都可以） +4 xbxudjdn 2026-03-18 4/200 2026-03-20 09:07 by 不168
[论文投稿] 申请回稿延期一个月，编辑同意了。但系统上的时间没变，给编辑又写邮件了，没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 0854，计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭