24小时热门版块排行榜    

查看: 1901  |  回复: 9

baiwei57

金虫 (正式写手)

[求助] WB实验问题求助

组蛋白H3荧光信号很强,但是曝光H3K9二甲基化位点和H3K4甲基化却无荧光,上样量及实验条件完全一致,请问什么原因?如何改进?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

好好过每一天
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

woai43

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-27 12:38:34
gyesang: 回帖置顶 2013-11-27 12:38:35
baiwei57: 金币+2 2013-11-28 12:17:27
H3K9me2和H3K4me相对H3丰度低,估计是抗体的问题。如果有人工合成的带有H3K9me2修饰的histone tail,建议做个dot blot ,确定抗体是否能够识别这一修饰。
6楼2013-11-27 11:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

953162729

铜虫 (初入文坛)

不知道啊
············
2楼2013-11-26 18:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

953162729

铜虫 (初入文坛)

3楼2013-11-26 18:05:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lovebirdshs

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2013-11-26 19:14:17
baiwei57: 金币+2, 有帮助 2013-11-26 20:08:26
甲基化后造成蛋白空间结构改变,结合基团被包埋导致曝光失败,这个以前遇到过的   也不是所有蛋白修饰后都会这样   运气比较差而已
孤独的舞者
4楼2013-11-26 18:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)

?跑电泳之前不是煮沸变性了吗,蛋白空间结构应该打开了呀,我看文献做的是小鼠肾脏,还有心脏的组蛋白H3的甲基化修饰都曝出来了
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
5楼2013-11-26 19:33:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by woai43 at 2013-11-27 11:11:57
H3K9me2和H3K4me相对H3丰度低,估计是抗体的问题。如果有人工合成的带有H3K9me2修饰的histone tail,建议做个dot blot ,确定抗体是否能够识别这一修饰。

抗体是一家公司(CST)的,同时买的,抗体说明书上的WB图片条带很清晰
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
7楼2013-11-27 15:37:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woai43

金虫 (正式写手)

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-29 14:15:13
引用回帖:
7楼: Originally posted by tupeipei at 2013-11-27 15:37:03
抗体是一家公司(CST)的,同时买的,抗体说明书上的WB图片条带很清晰...

抗体说明书的WB样品跟你的实验样品是否是一类样品,WB上样的量,H3K9me2修饰的丰度,提取方法都可能不相同。同一家公司的不同抗体未必都是好的,现在是你抗出来没有信号,首先就应该排除抗体不好的因素,如果你认为抗体是没有问题的,那可能就只能从提高loading量上入手了。
8楼2013-11-27 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shawn2006

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
baiwei57: 金币+2 2013-11-29 11:18:27
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-11-29 14:15:04
本帖内容被屏蔽

9楼2013-11-29 00:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)

呵呵,已经做出来了,一抗从室温2h改成4度过夜就暴出来了
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
10楼2014-04-14 21:47:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baiwei57 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +5 Mqqqqqq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:46 by zhukairuo
[考研] 350求调剂 +3 weudhdk 2026-03-19 3/150 2026-03-20 20:44 by JourneyLucky
[考研] 295材料求调剂,一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 材料080500调剂求收留 +8 一颗meteor 2026-03-13 8/400 2026-03-20 20:00 by zhukairuo
[考研] 353求调剂 +3 拉钩不许变 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:56 by JourneyLucky
[考研] 319求调剂 +3 小力气珂珂 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:47 by JourneyLucky
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 8/400 2026-03-20 15:58 by babero
[考研] 304求调剂 +5 曼殊2266 2026-03-18 5/250 2026-03-20 09:00 by ZHANG0tao
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[考研] 一志愿中国海洋大学,生物学,301分,求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
[考研] 081700化工学硕调剂 +3 【1】 2026-03-16 3/150 2026-03-19 23:40 by edmund7
[考研] 288求调剂 +15 于海海海海 2026-03-19 15/750 2026-03-19 22:41 by 学员8dgXkO
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 【同济软件】软件(085405)考研求调剂 +3 2026eternal 2026-03-18 3/150 2026-03-18 19:09 by 搏击518
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[基金申请] 被我言中:新模板不强调格式了,假专家开始管格式了 +4 beefly 2026-03-14 4/200 2026-03-17 22:04 by 黄鸟于飞Chao
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
信息提示
请填处理意见