应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » WB实验问题求助
51/1返回列表
查看: 2378  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

baiwei57

金虫 (正式写手)

[求助] WB实验问题求助

组蛋白H3荧光信号很强，但是曝光H3K9二甲基化位点和H3K4甲基化却无荧光，上样量及实验条件完全一致，请问什么原因？如何改进？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
好好过每一天
1楼 2013-11-26 18:02:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woai43

金虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-29 14:15:13
引用回帖:
7楼: Originally posted by tupeipei at 2013-11-27 15:37:03
抗体是一家公司（CST）的，同时买的，抗体说明书上的WB图片条带很清晰...

抗体说明书的WB样品跟你的实验样品是否是一类样品，WB上样的量，H3K9me2修饰的丰度，提取方法都可能不相同。同一家公司的不同抗体未必都是好的，现在是你抗出来没有信号，首先就应该排除抗体不好的因素，如果你认为抗体是没有问题的，那可能就只能从提高loading量上入手了。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-11-27 16:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

Lovebirdshs

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-26 19:14:17
baiwei57: 金币+2, ★有帮助 2013-11-26 20:08:26
甲基化后造成蛋白空间结构改变，结合基团被包埋导致曝光失败，这个以前遇到过的   也不是所有蛋白修饰后都会这样   运气比较差而已
赞一下 回复此楼
孤独的舞者
4楼2013-11-26 18:38:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tupeipei

铜虫 (初入文坛)
？跑电泳之前不是煮沸变性了吗，蛋白空间结构应该打开了呀，我看文献做的是小鼠肾脏，还有心脏的组蛋白H3的甲基化修饰都曝出来了
赞一下 回复此楼
实验虐我千百遍，我待实验如初恋
5楼2013-11-26 19:33:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woai43

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 12:38:34
gyesang: 回帖置顶 2013-11-27 12:38:35
baiwei57: 金币+2 2013-11-28 12:17:27
H3K9me2和H3K4me相对H3丰度低，估计是抗体的问题。如果有人工合成的带有H3K9me2修饰的histone tail，建议做个dot blot ，确定抗体是否能够识别这一修饰。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2013-11-27 11:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭