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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1088.2
散金: 119
红花: 7
帖子: 954
在线: 124.3小时
虫号: 1255578
注册: 2011-04-05
性别: MM
专业: 中药资源

[求助] 求教，荧光定量PCR标曲问题

本人做标曲做了5个点，但是总是有一个点没做好，剔除那个点后，线性还算好，扩增效率90%~110%之间，引物特异性是考察过的，有稍微的引物峰，但未超过阈值，因为做过几次了，还是这样，且做实验试剂耗材已用完，仪器使用需收费，想了解下，4个点虽然不严谨，但可否接受呢？在此附上图片，请大侠分析，谢谢啦！

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2.jpg

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思路决定出路。。。

1楼 2013-11-25 22:38:40

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

real-time

至尊木虫 (著名写手)

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在线: 293.1小时
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注册: 2013-05-09
专业: 遗传学研究新技术与方法

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-27 12:38:03
lmcyjxs: 回帖置顶 2013-12-05 08:49:21

引用回帖:

6楼: Originally posted by lmcyjxs at 2013-11-26 18:57:11
是这样的，这个起始浓度已经是没有稀释的混合液了，5倍梯度稀释，有些基因表达量本来就很低，这样就不可能有完美的平台期，那请问还有什么方法可以改进呢？...

你现在做标准曲线碰到的问题是你的样本浓度不够高
你的样品是什么，RAN DNA 或者 CDNA？
你的标准曲线是用什么做的？
如果后面要检测的样品是DNA，那可以做克隆，用线性化的质粒来做标准曲线和体系优化
如果后面要检测的样品的RNA（做一步法，就是逆转录和real time一起做的），那可以做体外转录，用体外转录RNA来做标准曲线和体系优化