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张彦飞

新虫 (初入文坛)

[求助] 多亚基酶蛋白的纯化

最近想要纯化几个复合酶,酶由多个不同的亚基组成,我想问问有没有哪位大侠做过类似的实验,这样的酶蛋白是怎么纯化呢,一个一个的纯化完放到一起呢,还是放到一个质粒上一起纯化呢?
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-20 10:31:47
张彦飞: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-20 21:04:33
多亚基复合体在体外的组装通常比较困难。你如果不能直接从原体系分离,需要过表达在其它体系里,需要做共表达,确定产物具有活性后后纯化整个复合体。
3楼2013-11-20 07:53:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-20 10:31:41
张彦飞: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-20 21:05:32
比较好的方法是把co-expression所有的亚基,然后纯化复合体。有一些质粒可以插入不同的片段,也可以用不同的质粒分别携带不同质粒,记得不同质粒之间的相容性。

good luck!
行至水穷处,坐看云起时
2楼2013-11-19 21:02:04
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张彦飞

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-20 07:53:28
多亚基复合体在体外的组装通常比较困难。你如果不能直接从原体系分离,需要过表达在其它体系里,需要做共表达,确定产物具有活性后后纯化整个复合体。

谢谢谢谢
4楼2013-11-20 21:04:47
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