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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 多亚基酶蛋白的纯化
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张彦飞

新虫 (初入文坛)

[求助] 多亚基酶蛋白的纯化

最近想要纯化几个复合酶，酶由多个不同的亚基组成，我想问问有没有哪位大侠做过类似的实验，这样的酶蛋白是怎么纯化呢，一个一个的纯化完放到一起呢，还是放到一个质粒上一起纯化呢？
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1楼 2013-11-19 11:37:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-20 10:31:47
张彦飞: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-20 21:04:33
多亚基复合体在体外的组装通常比较困难。你如果不能直接从原体系分离，需要过表达在其它体系里，需要做共表达，确定产物具有活性后后纯化整个复合体。
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3楼2013-11-20 07:53:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-20 10:31:41
张彦飞: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-11-20 21:05:32
比较好的方法是把co-expression所有的亚基，然后纯化复合体。有一些质粒可以插入不同的片段，也可以用不同的质粒分别携带不同质粒，记得不同质粒之间的相容性。

good luck!
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2013-11-19 21:02:04
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张彦飞

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-11-20 07:53:28
多亚基复合体在体外的组装通常比较困难。你如果不能直接从原体系分离，需要过表达在其它体系里，需要做共表达，确定产物具有活性后后纯化整个复合体。

谢谢谢谢
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4楼2013-11-20 21:04:47
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