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老狗妹

新虫 (小有名气)

[求助] 求助荧光定量

大家好，入门荧光定量，不太懂特来请教大家。首先用的是takara的一步反转录和荧光定量试剂盒，不知道荧光定量pcr体系中所加的反转录产物需要多少？即模板量要加多少？还有CT值达到多少才比较好？各个处理之间的模板量要加一样的吗？谢谢
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1楼 2013-11-11 19:57:33
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615780236

禁虫 (知名作家)

建设者

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
老狗妹: 金币+3, 博学EPI+1, ★有帮助 2013-11-12 07:52:15
宋全伟: 金币+1, 欢迎常来有奖问答【起名】版块参与讨论 2013-11-12 08:04:06
模板最好选择不一样的，这样多样性上一点，量的话不要太多，少一点比较好
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2楼2013-11-11 23:40:21
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老狗妹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 615780236 at 2013-11-11 23:40:21
模板最好选择不一样的，这样多样性上一点，量的话不要太多，少一点比较好

你好，你的意思是做个浓度梯度吗？
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3楼2013-11-12 07:51:55
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doglet

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
老狗妹: 金币+5, ★有帮助 2013-11-13 19:59:20
一般情况下，模板的量控制在，ct值在25-30之间是最好的，这是已经摸好PCR条件的情况下，正常情况应先是做一次PCR确定反应条件，然后做标准曲线，然后是再做要做的样品，这样做样品不会浪费太多的
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4楼2013-11-13 14:38:51
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