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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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rlhlove

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化总是不成功

我的目的片段在1800bp左右,是由简并引物扩出来的,连接转化总是没有结果,有好几次是出现了菌落,但是菌落pcr还是没有结果,有时候直接连菌落都没有。              
求大神指点!!!谢谢!!!
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-01 11:35:28
rlhlove: 金币+1, 有帮助 2013-11-04 08:38:18
建议你优化目的片段的回收量,按照胶回收后电泳看下载体和片段浓度,按照摩尔比1:1-3连接。大部分情况都可以解决,还有确定平板抗性没有涂错。
2楼2013-11-01 10:39:01
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winnerfc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rlhlove: 金币+1 2013-11-04 08:38:27
设置空载连接对照,有菌落但菌液pcr没结果时不一定没连上,可以先挑几个抽质粒双酶切检测下
3楼2013-11-02 22:15:36
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