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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接转化总是不成功
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rlhlove

金虫 (小有名气)

[求助] 连接转化总是不成功

我的目的片段在1800bp左右，是由简并引物扩出来的，连接转化总是没有结果，有好几次是出现了菌落，但是菌落pcr还是没有结果，有时候直接连菌落都没有。              
求大神指点！！！谢谢！！！
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1楼 2013-11-01 09:29:06
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zhouxiaofei

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-11-01 11:35:28
rlhlove: 金币+1, ★有帮助 2013-11-04 08:38:18
建议你优化目的片段的回收量，按照胶回收后电泳看下载体和片段浓度，按照摩尔比1:1-3连接。大部分情况都可以解决，还有确定平板抗性没有涂错。
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2楼2013-11-01 10:39:01
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winnerfc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rlhlove: 金币+1 2013-11-04 08:38:27
设置空载连接对照，有菌落但菌液pcr没结果时不一定没连上，可以先挑几个抽质粒双酶切检测下
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3楼2013-11-02 22:15:36
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