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zoemeig

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化问题

想请问一下,我的蛋白不管咪唑怎么洗,还有过分子筛也都分不开,而且这个杂蛋白的分子量跟我的目的蛋白的分子量相差很多,至少有30kD,这是为什么?前几天过阴离子交换柱,我的蛋白等电点在6.2左右,用的10mM Tris,20mM NaCl,pH 8.0缓冲液来平衡柱子,1M NaCl梯度洗脱,可蛋白全流穿了
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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zoemeig(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2013-10-29 12:30:19
用的10mM Tris,20mM NaCl,pH 8.0缓冲液来平衡柱子
阴离子交换柱用的10mM Tris,pH 8.0缓冲液来平衡柱子试试看,
阴离子交换柱不耐盐,你的样品过柱子前也要除盐,不然挂不住。
建议样品先用10mM Tris,pH 8.0缓冲液透析除盐。
跑胶的时候,非变性胶也一起跑,和SDS-Page对比一下,看一看有没有啥不一样的。
曾子曰:“士不可以不弘毅,任重而道远。仁以为己任,不亦重乎?死而后已,不亦远乎?”
2楼2013-10-29 11:36:45
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