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zoemeig

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白纯化问题

想请问一下，我的蛋白不管咪唑怎么洗，还有过分子筛也都分不开，而且这个杂蛋白的分子量跟我的目的蛋白的分子量相差很多，至少有30kD，这是为什么？前几天过阴离子交换柱，我的蛋白等电点在6.2左右，用的10mM Tris，20mM NaCl，pH 8.0缓冲液来平衡柱子，1M NaCl梯度洗脱，可蛋白全流穿了
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1楼 2013-10-29 10:44:39
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zoemeig(kx444555代发): 金币+4, 鼓励交流 2013-10-29 12:30:19
用的10mM Tris，20mM NaCl，pH 8.0缓冲液来平衡柱子
阴离子交换柱用的10mM Tris，pH 8.0缓冲液来平衡柱子试试看，
阴离子交换柱不耐盐，你的样品过柱子前也要除盐，不然挂不住。
建议样品先用10mM Tris，pH 8.0缓冲液透析除盐。
跑胶的时候，非变性胶也一起跑，和SDS-Page对比一下，看一看有没有啥不一样的。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-10-29 11:36:45
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