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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒抽提后纯水保存一周，质粒消失！DNAase污染吗？
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sweleon

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒抽提后纯水保存一周，质粒消失！DNAase污染吗？

最近发现之前抽提的质粒消失了（用omega的大提试剂盒做的，-40存放了半个月左右），洗脱时候用的纯水。因为实验室条件有限，离心机转速上不去，溶液3的沉淀效果不是特别好，有部分进入了吸附柱。想问问大家，这个是不是因为沉淀不完全，DNAase的污染造成的？

另外试剂盒的溶液用光了，但是柱子多了很多，能不能自己按照常规的配方配制溶液1-3，最后用柱子吸附而不用常规的酚氯仿抽提来获得质粒？

以上两个问题望高手解答。谢谢啦~~

ps：试剂盒太贵，单独溶液买的和试剂盒一个价了，太坑了~
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1楼 2013-10-29 10:23:40
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testgfri

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-30 00:05:30
sweleon: 金币+5, ★有帮助, 通用的处理方法！也谢谢再次提醒沉淀问题 2013-10-31 15:52:38
手提法溶液三后上清直接上柱，75%乙醇洗，最后用水洗脱
注意上清上柱时宁损失勿带沉淀，
用水洗脱一般情况下问题不大，但是水需要灭菌
赞一下 回复此楼
3楼2013-10-29 16:50:47
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yinchu1990

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-29 15:58:56
是一样的 ，差不多，不要用纯水洗脱啊，因为纯水的PH较低 会导致质粒降解的
可以配10mM Tris PH 8.0 洗脱，
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-29 14:55:49
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