| 查看: 1543 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
风吹我已散木虫 (正式写手)
|
[求助]
酶活求助啊！！！！！
|
||
|
各位，求救!!!!!!!!! 我是要测一个在大肠杆菌里面异源表达的一个蛋白的酶活，这个酶原则上来说，可以催化A和B生成C和D，反应是不可逆的。然后我就摇菌，IPTG诱导，超声破碎（PBS缓冲液+BSA+10%甘油）提蛋白，然后分光光度计测底物A的变化。变化是有了，可是负对照（不加IPTG诱导）也有变化啊（底物A的吸收值下降的程度和我加IPTG诱导后蛋白提取物的结果差不多）。然后我怀疑是不是我的这个转化后的大肠杆菌可以表达微量的目的蛋白，这微量的蛋白足以催化我的反应？ 于是我把蛋白换成是蛋白提取液（PBS缓冲液+BSA+10%甘油），再加两个底物A和B，结果，悲催了，分光光度计显示的变化和之前的实验结果一样！！！！！！！！！！ 酶活实验步骤：1，空白对照（Tris+双蒸水+蛋白粗提物+BSA), Measure Blank 2，Tris+双蒸水+BSA+底物A, Measure Sample(底物A在A 300nm有最大吸收峰） 3， 加蛋白粗提物，Measure Sample 4，加底物B，Measure Sample（所有实验在此时，A 300nm下降剧烈，吸收值约变为之前的1/4）。不知道是什么原因，我原本想着可能是目的蛋白在大肠杆菌里面的微量表达也注意催化我的反应；可是不加蛋白，将试验中加蛋白的步骤换成是蛋白提取液（PBS缓冲液+BSA+10%甘油）， 分光光度计显示的结果也基本一样，到底是什么原因呢？是BSA的干扰么？还是？？？？？？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有178人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
酶活力计算公式，求助啊
已经有5人回复- 求助：过氧化物酶提取及活性测定，颜色、吸光度都无变化
已经有9人回复
- 求助，如何用发光法测定酶活Km值
已经有4人回复
- 【求助】酶活力单位之间的换算
已经有7人回复
- 【求助/交流】果胶脂酶的酶活力测定
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教大家对酶活力是怎么定义的？
已经有7人回复
- 【求助】果胶酶活力的测定
已经有22人回复
- 【求助/交流】求助测木瓜蛋白酶活性的方法！！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】求酶活力
已经有11人回复
- 【求助/交流】脂肪酶活性检测
已经有17人回复
- 【求助】脂肪酶活力测定
已经有5人回复
- 【求助/交流】pNPG测酶活
已经有17人回复
- 【求助/交流】氧气会不会使某些酶失活？？
已经有10人回复
- 【求助/交流】酶活测定求助
已经有9人回复
- 【求助/交流】粗酶液酶活测定
已经有28人回复
- 【求助/交流】葡萄糖氧化酶酶活的测定方法
已经有17人回复
- 【求助】DNS法测试果胶酶活力！
已经有6人回复
- 【求助】纳豆激酶活性测定
已经有18人回复
- 【求助】土壤脲酶活性测定中的问题
已经有47人回复
风吹我已散
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4337.3
- 散金: 87
- 红花: 3
- 帖子: 453
- 在线: 245.4小时
- 虫号: 2482485
- 注册: 2013-05-26
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2013-10-19 09:47:31
2楼2013-10-18 21:17:01
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7554.2
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1346.1小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
3楼2013-10-18 22:34:06
风吹我已散
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 4337.3
- 散金: 87
- 红花: 3
- 帖子: 453
- 在线: 245.4小时
- 虫号: 2482485
- 注册: 2013-05-26
- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2013-10-19 09:48:13