应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶活求助啊！！！！！
51/1返回列表
查看: 1705  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)

[求助] 酶活求助啊！！！！！

各位，求救!!!!!!!!!
我是要测一个在大肠杆菌里面异源表达的一个蛋白的酶活，这个酶原则上来说，可以催化A和B生成C和D，反应是不可逆的。然后我就摇菌，IPTG诱导，超声破碎（PBS缓冲液+BSA+10%甘油）提蛋白，然后分光光度计测底物A的变化。变化是有了，可是负对照（不加IPTG诱导）也有变化啊（底物A的吸收值下降的程度和我加IPTG诱导后蛋白提取物的结果差不多）。然后我怀疑是不是我的这个转化后的大肠杆菌可以表达微量的目的蛋白，这微量的蛋白足以催化我的反应？
于是我把蛋白换成是蛋白提取液（PBS缓冲液+BSA+10%甘油），再加两个底物A和B，结果，悲催了，分光光度计显示的变化和之前的实验结果一样！！！！！！！！！！
酶活实验步骤：1，空白对照（Tris+双蒸水+蛋白粗提物+BSA), Measure Blank
                         2，Tris+双蒸水+BSA+底物A, Measure Sample(底物A在A 300nm有最大吸收峰）
                         3， 加蛋白粗提物，Measure Sample
                         4，加底物B，Measure Sample（所有实验在此时，A 300nm下降剧烈，吸收值约变为之前的1/4）。不知道是什么原因，我原本想着可能是目的蛋白在大肠杆菌里面的微量表达也注意催化我的反应；可是不加蛋白，将试验中加蛋白的步骤换成是蛋白提取液（PBS缓冲液+BSA+10%甘油）， 分光光度计显示的结果也基本一样，到底是什么原因呢？是BSA的干扰么？还是？？？？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-18 19:40:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
风吹我已散: 金币+2, ★有帮助 2013-10-19 09:48:25
听起来我更愿意相信你的底物不稳定
能具体说下你是催化的什么反应吗
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2013-10-18 22:34:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qapollo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-10-19 01:25:19
风吹我已散: 金币+2, ★有帮助 2013-10-19 09:47:42
先看看你的蛋白是什么来源。原核系统里表达的蛋白质不能正确折叠，如果你的蛋白质是真核生物的可能没有酶活。
赞一下 回复此楼
2楼2013-10-18 21:17:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-18 22:34:06
听起来我更愿意相信你的底物不稳定
能具体说下你是催化的什么反应吗

催化乙酰辅酶A和乙酰乙酰辅酶A生成HMG-CoA和CoASH的
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-19 09:47:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风吹我已散

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by qapollo at 2013-10-18 21:17:01
先看看你的蛋白是什么来源。原核系统里表达的蛋白质不能正确折叠，如果你的蛋白质是真核生物的可能没有酶活。

真核生物的，但是不加蛋白为什么也会有反应啊？
赞一下 回复此楼
5楼2013-10-19 09:48:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211电子信息347求调剂 +3 554916 2026-04-03 4/200 2026-04-09 22:24 by 554916
[考研] 材料与化工300求调剂 +19 肖开文 2026-04-09 20/1000 2026-04-09 22:22 by fenglj492
[考研] 一志愿华东师范生物学326分，求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-09 3/150 2026-04-09 16:20 by zhuimr
[考研] 专硕0854初试考材科基，求调剂 +7 3220548044 2026-04-06 10/500 2026-04-08 21:59 by hypershenger
[考研] 求调剂 +9 月@163.com 2026-04-07 11/550 2026-04-08 14:48 by qlm5820
[考研] 调剂 +18 不逢春 2026-04-05 19/950 2026-04-07 22:04 by lijunpoly
[考研] 295求调剂 +18 xndjjj 2026-04-04 19/950 2026-04-07 11:02 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +7 15615482637 2026-04-04 7/350 2026-04-06 22:56 by chenzhimin
[考研] 材料调剂 +5 小刘同学吖吖 2026-04-06 5/250 2026-04-06 18:34 by sherry_1901
[考研] 307求调剂 +3 所念及所望 2026-04-06 3/150 2026-04-06 17:30 by 土木硕士招生
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +6 常雨阳上岸 2026-04-05 7/350 2026-04-06 12:36 by lys0704
[考研] 化学357分，考研调剂 +11 .Starry. 2026-04-04 12/600 2026-04-06 06:28 by houyaoxu
[考研] 一志愿青科085500，初试295分，公共课213分 +3 遇到的人愿望都� 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:45 by 蓝云思雨
[考研] 工科277分求调剂材料 +8 上了上了上哦 2026-04-05 9/450 2026-04-05 13:05 by wwytracy
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 283分求调剂 +7 小聂爱学习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 21:51 by hemengdong
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[考研] 309求调剂 +4 快乐的小白鸽 2026-04-04 5/250 2026-04-04 15:55 by cql1109
[考研] 考研求调剂 +3 木心想继续深造 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:56 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭