应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因
51/1返回列表
查看: 4879  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

解瑶123

银虫 (正式写手)

[求助] 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因 已有3人参与

实验室合成了一个新的环形载体4626bp，内含有所需目的基因796bp，该基因上下游两端分别为EcoRI和XbaI酶切位点，但目的基因XbaI酶切位点下游还有一该酶切位点，两位点间隔953bp。我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因，然后分别用这两种酶单酶切。琼脂糖电泳得到图（MAKER 为2000），请问该图中的条带怎么解释？（图中从上到下一次为用EcoRI单酶切、用XbaI酶单切、Marker).我还做了很多次双酶切，但都没有成功，这是为什么，我该怎么办？请高手指教切位点
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 1.bmp
    • 2013-10-11 12:15:37, 1.25 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-11 12:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangqi1107

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
解瑶123: 金币+5 2013-10-14 16:02:53
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-10-14 19:01:48
你都不知道你用的质粒到底是什么，那就别用。起码图谱要完全清楚吧！就两个酶切位点的质粒还真没见过。看你图片显示 E酶切正确 Xbal 切出了两条带，说明有两个Xba  这种两个酶切位点 你怎么切下来你的目的基因啊 说不定你双酶切会切出三条片段呢
赞一下 回复此楼
8楼2013-10-13 21:25:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把XbaI位点所在的那一段序列发上来，需要看这段序列后帮你判断
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-10-11 12:18:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-13 18:01:04
你质粒是从什么e.coli.提取的? 就是DH5alpha或者Xl10b吗?
如果是的话,那基本上应该是XbaI的问题, XbaI会被dam甲基化抑制,你找别的实验室要点dam-dcm-的e.coli.重新转化提取质粒
要么就换个酶,别用XbaI
赞一下(1人) 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2013-10-11 12:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
还有哥们你这图下载还扣积分啊
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-11 12:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 8/400 2026-08-23 00:28 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +10 kulium 2026-08-21 13/650 2026-08-21 21:58 by alongwaytogo
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭