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解瑶123

银虫 (正式写手)

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[求助] 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因已有3人参与

实验室合成了一个新的环形载体4626bp，内含有所需目的基因796bp，该基因上下游两端分别为EcoRI和XbaI酶切位点，但目的基因XbaI酶切位点下游还有一该酶切位点，两位点间隔953bp。我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因，然后分别用这两种酶单酶切。琼脂糖电泳得到图（MAKER 为2000），请问该图中的条带怎么解释？（图中从上到下一次为用EcoRI单酶切、用XbaI酶单切、Marker).我还做了很多次双酶切，但都没有成功，这是为什么，我该怎么办？请高手指教切位点

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2013-10-11 12:15:37, 1.25 M

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1楼2013-10-11 12:15:41

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tiankong很蓝

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-11 12:56:16
你质粒是从什么e.coli.提取的? 就是DH5alpha或者Xl10b吗?
如果是的话,那基本上应该是XbaI的问题, XbaI会被dam甲基化抑制,你找别的实验室要点dam-dcm-的e.coli.重新转化提取质粒
要么就换个酶,别用XbaI

含目的基因的质粒不是我们实验室合成的，我不知道含该质粒的菌是哪一种，只知道是E.coli Amp/Kan。还有我所需的目的片段两端只有EcoRI和XbaI两酶切位点，我没办法换酶啊。