应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因
51/1返回列表
查看: 4395  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

解瑶123

银虫 (正式写手)

[求助] 我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因 已有3人参与

实验室合成了一个新的环形载体4626bp，内含有所需目的基因796bp，该基因上下游两端分别为EcoRI和XbaI酶切位点，但目的基因XbaI酶切位点下游还有一该酶切位点，两位点间隔953bp。我用EcoRI和XbaI酶双酶切切不下来目的基因，然后分别用这两种酶单酶切。琼脂糖电泳得到图（MAKER 为2000），请问该图中的条带怎么解释？（图中从上到下一次为用EcoRI单酶切、用XbaI酶单切、Marker).我还做了很多次双酶切，但都没有成功，这是为什么，我该怎么办？请高手指教切位点
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 1.bmp
    • 2013-10-11 12:15:37, 1.25 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-11 12:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiankong很蓝

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-10-11 12:56:16
你质粒是从什么e.coli.提取的? 就是DH5alpha或者Xl10b吗?
如果是的话,那基本上应该是XbaI的问题, XbaI会被dam甲基化抑制,你找别的实验室要点dam-dcm-的e.coli.重新转化提取质粒
要么就换个酶,别用XbaI

含目的基因的质粒不是我们实验室合成的，我不知道含该质粒的菌是哪一种，只知道是E.coli Amp/Kan。还有我所需的目的片段两端只有EcoRI和XbaI两酶切位点，我没办法换酶啊。
赞一下 回复此楼
深呼吸，嘴角上扬，告诉自己：我很好！！！
7楼2013-10-13 16:41:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把XbaI位点所在的那一段序列发上来，需要看这段序列后帮你判断
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-10-11 12:18:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-13 18:01:04
你质粒是从什么e.coli.提取的? 就是DH5alpha或者Xl10b吗?
如果是的话,那基本上应该是XbaI的问题, XbaI会被dam甲基化抑制,你找别的实验室要点dam-dcm-的e.coli.重新转化提取质粒
要么就换个酶,别用XbaI
赞一下(1人) 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
3楼2013-10-11 12:56:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
还有哥们你这图下载还扣积分啊
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-10-11 12:57:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 21 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 6/300 2026-04-19 13:00 by Aaron_zyn
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 320求调剂 +5 深郊akm 2026-04-17 5/250 2026-04-18 19:52 by 王珺璞
[考研] 297，工科调剂? +5 河南农业大学-能 2026-04-14 5/250 2026-04-18 15:17 by Equinoxhua
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[考博] 申博/考博 +3 啃面包的小书虫 2026-04-17 4/200 2026-04-17 23:54 by 阳阳阳^_^
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +10 否极泰来2026 2026-04-15 12/600 2026-04-17 17:54 by mapenggao
[考研] 295分求调剂 +5 ?要上岸? 2026-04-17 5/250 2026-04-17 16:51 by fenglj492
[考研] 294求调剂 +7 淡然654321 2026-04-17 8/400 2026-04-17 16:36 by wutongshun
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 药学求调剂 +14 喽哈加油 2026-04-14 16/800 2026-04-16 10:15 by beilsong20
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 通信工程求调剂！！！ +6 zlb770521 2026-04-14 6/300 2026-04-15 20:00 by 学员JpLReM
[考研] 求调剂 +12 何气正 2026-04-13 13/650 2026-04-14 14:47 by zs92450
[考研] 105500药学求调剂 +4 x_skys 2026-04-12 4/200 2026-04-14 13:37 by rndfc
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 考研英一数一338分 +9 长江大学东校区 2026-04-13 10/500 2026-04-14 00:41 by 王珺璞
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭