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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 询问膜蛋白亲和纯化，纯化后的膜蛋白易降解
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mihutianshi

铜虫 (正式写手)

[求助] 询问膜蛋白亲和纯化，纯化后的膜蛋白易降解

烦请各位专家:
         小弟用亲和纯化的方法分离膜蛋白，但是分离后的蛋白质在-30℃条件下不到一周的时间就降解完毕，因为做蛋白质结晶是在4℃下保存。所有我现在想解决蛋白质分解问题。
     我的蛋白质易降解的原因是不是因为我亲和纯化时的洗脱液没有进行灭菌，再者我的洗脱剂是氟西泮，氟西泮的缓冲液能否进行高压灭菌，谢谢各位。
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1楼 2013-10-11 09:49:39
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同东中郎将

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-10-11 12:03:37
mihutianshi: 金币+1, ★有帮助 2013-10-16 18:26:02
加点PMSF和甘油试一试吧。蛋白降解原因很多，不同蛋白原因又不一样，头大啊。
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曾子曰：“士不可以不弘毅，任重而道远。仁以为己任，不亦重乎？死而后已，不亦远乎？”
2楼2013-10-11 11:00:49
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-10-11 14:54:28
mihutianshi: 金币+1, ★有帮助 2013-10-16 18:26:09
水解酶无处不在，你看不见他，他在水解你的蛋白

加入罗氏的tablet抑制水解酶，然后可以的话，尽可能过另外一个柱子纯化，浓缩蛋白，浓度太稀的蛋白，的确不耐放。
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行至水穷处，坐看云起时
3楼2013-10-11 12:30:48
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