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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 对照组和试验组的Real-Time PCR 结果和Western结果相反
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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 对照组和试验组的Real-Time PCR 结果和Western结果相反

各位亲，最近试验遇到麻烦，很是不解。
   对照组和诱导组的 培养细胞中目的基因的Real-Time PCR 结果，显示： 目的gene在对照组和试验组都随培养时间增加而表达上升；对照组表达水平〈诱导组

    Western结果，显示：
   1. 分泌到培养基内的目的蛋白： 对照组随培养时间增加而表达上升；诱导组则随培养时间增加而表达下降；而且，对照组表达水平〉诱导组
   2.细胞内目的蛋白：  对照组和诱导组都随培养时间增加而表达上升；但是，对照组表达水平〉诱导组
   
     P.S.: 所提取的蛋白质BCA测定后浓度较低，进行了TCA沉淀，但是，TCA沉淀后没有测定所得总蛋白的浓度，直接进行Western的。

    本人对于该结果超级疑惑，不知道作何解释！！
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因为喜欢，所以担忧，所以后退
1楼 2013-10-10 15:00:03
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cuihuanxian

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-13 14:13:32
bjgymilyxz: 金币+2, ★有帮助 2014-01-30 13:00:34
1、目的gene在对照组和试验组都随培养时间增加而表达上升；对照组表达水平〈诱导组，但是否差异显著？否则没意义。
2、 所提取的蛋白质BCA测定后浓度较低，进行了TCA沉淀，但是，TCA沉淀后没有测定所得总蛋白的浓度，直接进行Western的，这样样品之间应该没什么可比性吧，上样量不一样，没有一个统一标准，怎么去比较？
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2楼2013-11-13 12:48:23
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