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bjgymilyxz

木虫 (小有名气)

[求助] 对照组和试验组的Real-Time PCR 结果和Western结果相反

各位亲,最近试验遇到麻烦,很是不解。
   对照组和诱导组的 培养细胞中目的基因的Real-Time PCR 结果,显示: 目的gene在对照组和试验组都随培养时间增加而表达上升;对照组表达水平〈诱导组

    Western结果,显示:
   1. 分泌到培养基内的目的蛋白: 对照组随培养时间增加而表达上升;诱导组则随培养时间增加而表达下降;而且,对照组表达水平〉诱导组
   2.细胞内目的蛋白:  对照组和诱导组都随培养时间增加而表达上升;但是,对照组表达水平〉诱导组
   
     P.S.: 所提取的蛋白质BCA测定后浓度较低,进行了TCA沉淀,但是,TCA沉淀后没有测定所得总蛋白的浓度,直接进行Western的。

    本人对于该结果超级疑惑,不知道作何解释!!
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cuihuanxian

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-11-13 14:13:32
bjgymilyxz: 金币+2, 有帮助 2014-01-30 13:00:34
1、目的gene在对照组和试验组都随培养时间增加而表达上升;对照组表达水平〈诱导组,但是否差异显著?否则没意义。
2、 所提取的蛋白质BCA测定后浓度较低,进行了TCA沉淀,但是,TCA沉淀后没有测定所得总蛋白的浓度,直接进行Western的,这样样品之间应该没什么可比性吧,上样量不一样,没有一个统一标准,怎么去比较?
2楼2013-11-13 12:48:23
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