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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] 细菌接种后不生长??

本人构建好了大肠杆菌表达菌后,通过sds-page及western bolt 确定表达成功后,接下来进行大量培养表达,但是问题出现了:甘油菌经过平板划线后,挑菌落于液体LB/amp中培养,过夜培养没有生长,表达的蛋白应该是有一定毒性的,这会不会严重影响菌种活性呢?就算划线活化也没用?
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smile to the world
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smallhacker

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, guingzhu! 2013-10-11 19:25:17
有可能是,接种时,菌体量太小或没有成功接种,可待菌落大些,再接种
2楼2013-10-11 15:01:40
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微生物菌剂

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-10-11 19:25:32
甘油菌划线时用的平板是含有氨苄抗性?如果构建没问题的话,平板能长,LB中也应该能长的。要看看培养条件是否合适。至于楼上说的接种问题,应该不会是接种量的问题,牙签或者枪头粘一下就够了。要避免没有成功接种,可以多接几个平行试管
3楼2013-10-11 17:28:24
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 微生物菌剂 at 2013-10-11 17:28:24
甘油菌划线时用的平板是含有氨苄抗性?如果构建没问题的话,平板能长,LB中也应该能长的。要看看培养条件是否合适。至于楼上说的接种问题,应该不会是接种量的问题,牙签或者枪头粘一下就够了。要避免没有成功接种, ...

谢谢!平板都是能长的,就是到了液体培养基(含氨苄)才不长的,接种不是问题
smile to the world
4楼2013-10-12 17:50:22
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by smallhacker at 2013-10-11 15:01:40
有可能是,接种时,菌体量太小或没有成功接种,可待菌落大些,再接种

谢谢,我想是菌种就是不行的,可能表达的蛋白毒性较强吧,只能重新转化了
smile to the world
5楼2013-10-12 17:50:57
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

液体培养基是自配的还是购买公司的。若是自配的,有可能是PH值不合适。
6楼2013-10-13 00:43:13
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

内容已删除
smile to the world
7楼2013-10-13 10:28:03
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

平板连续传代能否生长?若能,则液体培养一定可以,不生长的原因只能从培养基和培养条件上去一个一个的查了。
8楼2013-10-13 20:38:13
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