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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌接种后不生长？？
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chenxiang29

银虫 (正式写手)

[求助] 细菌接种后不生长？？

本人构建好了大肠杆菌表达菌后，通过sds-page及western bolt 确定表达成功后，接下来进行大量培养表达，但是问题出现了：甘油菌经过平板划线后，挑菌落于液体LB/amp中培养，过夜培养没有生长，表达的蛋白应该是有一定毒性的，这会不会严重影响菌种活性呢？就算划线活化也没用？
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smile to the world
1楼 2013-10-09 16:08:38
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smallhacker

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, guingzhu！ 2013-10-11 19:25:17
有可能是，接种时，菌体量太小或没有成功接种，可待菌落大些，再接种
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2楼2013-10-11 15:01:40
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微生物菌剂

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-11 19:25:32
甘油菌划线时用的平板是含有氨苄抗性？如果构建没问题的话，平板能长，LB中也应该能长的。要看看培养条件是否合适。至于楼上说的接种问题，应该不会是接种量的问题，牙签或者枪头粘一下就够了。要避免没有成功接种，可以多接几个平行试管
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3楼2013-10-11 17:28:24
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chenxiang29

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 微生物菌剂 at 2013-10-11 17:28:24
甘油菌划线时用的平板是含有氨苄抗性？如果构建没问题的话，平板能长，LB中也应该能长的。要看看培养条件是否合适。至于楼上说的接种问题，应该不会是接种量的问题，牙签或者枪头粘一下就够了。要避免没有成功接种， ...

谢谢！平板都是能长的，就是到了液体培养基(含氨苄)才不长的，接种不是问题
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smile to the world
4楼2013-10-12 17:50:22
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chenxiang29

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by smallhacker at 2013-10-11 15:01:40
有可能是，接种时，菌体量太小或没有成功接种，可待菌落大些，再接种

谢谢，我想是菌种就是不行的，可能表达的蛋白毒性较强吧，只能重新转化了
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smile to the world
5楼2013-10-12 17:50:57
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

液体培养基是自配的还是购买公司的。若是自配的，有可能是PH值不合适。
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6楼2013-10-13 00:43:13
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chenxiang29

银虫 (正式写手)
内容已删除
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smile to the world
7楼2013-10-13 10:28:03
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yangxin9337

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

平板连续传代能否生长？若能，则液体培养一定可以，不生长的原因只能从培养基和培养条件上去一个一个的查了。
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8楼2013-10-13 20:38:13
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