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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 梯度荧光定量的程序如何设置
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jerryzyy

金虫 (小有名气)

[求助] 梯度荧光定量的程序如何设置

我正在做荧光定量，做的是土壤微生物的绝对定量，用普通的PCR扩增用的是梯度PCR，即退火温度从67-57度，每个循环降低0.5度，20个循环后，退火57，12个循环，我想知道，做荧光定量的时候我这个程序应该怎么设置，主要是后面溶解曲线的时候如果不是梯度PCR的话，直接从65升到95，每循环升5度，来做溶解曲线，而我现在如果是梯度PCR的话，这个溶解曲线这块应该怎么设置，请高手指点！非常感谢！
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1楼 2013-10-02 16:24:16
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猪猪

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jerryzyy at 2013-10-04 20:33:25
我现在发现荧光定量不能做降落的，获取荧光信息的时候只能在一个循环中获取，下一个循环中就获取不了了。...

荧光定量是可以做温度梯度的，这应该和仪器有关，我们用的是step
one PLUS，一块板上最多可以设置6个退火温度。
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6楼2013-10-05 09:22:16
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猪猪

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jerryzyy at 2013-10-07 14:39:33
可以做梯度ＰＣＲ，但是降落荧光ＰＣＲ设定不了啊，获取荧光信号只能出现在一个循环中，而降落ＰＣＲ是有两个变性，退火，延伸的循环啊，这个也跟机器不一样有关吗？...

确实是只能在一个循环中获取荧光信号。。。
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8楼2013-10-15 17:17:07
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