应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 梯度荧光定量的程序如何设置
51/1返回列表
查看: 2019  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)

[求助] 梯度荧光定量的程序如何设置

我正在做荧光定量，做的是土壤微生物的绝对定量，用普通的PCR扩增用的是梯度PCR，即退火温度从67-57度，每个循环降低0.5度，20个循环后，退火57，12个循环，我想知道，做荧光定量的时候我这个程序应该怎么设置，主要是后面溶解曲线的时候如果不是梯度PCR的话，直接从65升到95，每循环升5度，来做溶解曲线，而我现在如果是梯度PCR的话，这个溶解曲线这块应该怎么设置，请高手指点！非常感谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-02 16:24:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 猪猪 at 2013-10-05 09:22:16
荧光定量是可以做温度梯度的，这应该和仪器有关，我们用的是step
one PLUS，一块板上最多可以设置6个退火温度。...

可以做梯度ＰＣＲ，但是降落荧光ＰＣＲ设定不了啊，获取荧光信号只能出现在一个循环中，而降落ＰＣＲ是有两个变性，退火，延伸的循环啊，这个也跟机器不一样有关吗？
赞一下 回复此楼
7楼2013-10-07 14:39:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
熔解曲线就是一般方法设置。做熔解曲线是在反应完全进行完毕后通过逐步升高温度来看产物降解的过程，通过检测产物在熔解曲线峰的情况来判断产物是否单一。所以，无论你前面做了怎样的PCR，熔解曲线的做法是基本一样的。设置从Tm+5开始到95°C。通常的产物不会在70°C以下熔解，你的情况可以从67°C设置起始熔解曲线的温度。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

jerryzyy
2楼2013-10-04 05:16:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xhp_1638

铜虫 (小有名气)
初学者，愿意一块互相学习
赞一下 回复此楼
发展才是硬道理！
3楼2013-10-04 10:41:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jerryzyy

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-10-04 05:16:18
熔解曲线就是一般方法设置。做熔解曲线是在反应完全进行完毕后通过逐步升高温度来看产物降解的过程，通过检测产物在熔解曲线峰的情况来判断产物是否单一。所以，无论你前面做了怎样的PCR，熔解曲线的做法是基本一样 ...

我现在发现荧光定量不能做降落的，获取荧光信息的时候只能在一个循环中获取，下一个循环中就获取不了了。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-04 20:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 304求调剂 +6 小熊joy 2026-03-14 6/300 2026-03-16 12:59 by Iveryant
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 297求调剂 +4 学海漂泊 2026-03-13 4/200 2026-03-14 11:51 by 热情沙漠
[考研] 云南财经大学信息学院计算机学硕专硕学位点 +3 zjptai 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:23 by 飞行琦
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中科院，化学方向，295求调剂 +4 一氧二氮 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:35 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 274求调剂0856材料化工 +12 z2839474511 2026-03-11 13/650 2026-03-13 10:39 by peike
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 298求调剂 +3 Vv呀！ 2026-03-10 3/150 2026-03-10 22:40 by 剑诗杜康
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭