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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 根据文献提DNA，但提出来却是RNA,为什么呀

根据甜樱桃DNA的快速提取法文献提DNA，但提出来却是RNA,为什么呀
在装有备用材料的115ml离心管中加入
500μl经过预热的十六烷基三乙基溴化胺
(CTAB)提取液,该提取液含pH810的75mmol/L
Tris- HCl缓冲液, pH810的115mmol/L乙二胺
四乙酸(EDTA), 1105mol/L氯化钠, 115%十六
烷基三乙基溴化胺, 2%β-巯基乙醇。置65℃
水浴中30分钟,加入等体积的酚∶氯仿(1∶1),
充分混匀,静置10分钟,在每分钟6000转的离
心机上离心5分钟,然后取上清液置于另一离心管中,加入2倍体积的无水乙醇和015倍体积
的5mol/L氯化钠,于- 20℃下放置15分钟后,
每分钟8000转离心5分钟, 弃上清液。用
70%乙醇洗DNA沉淀一次,风干,加100μl超
纯水溶解。取1μl上样,用018%琼脂糖凝胶
电泳检测DNA的质量和浓度。 提取后电泳图像如下图，后四个是提的样，樱桃
根据文献提DNA，但提出来却是RNA,为什么呀
IMG_20130911_171628.jpg
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自己的路只有自己能负责
1楼 2013-09-11 20:50:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gskekeai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
内容已删除
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3楼2013-09-12 08:27:26
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三只小老虎

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有几个问题，你要注意，1、你的离心转速普遍过小，DNA沉淀不下去。一般我们都用12000rpm。2、你的电泳跑的时间过短，再多跑20分钟看看。3\加点rna酶处理一下。
一般提DNA，你要想保证产量的话，就尽可能的减少实验步奏，降低消耗。还有就是速度快，保持低温。
如果你的dna次生物质，如多糖，蒽，醌类较多的话，直接用试剂盒，速度快，产量高，还干净，可以用来做AFLP等酶切工作。
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6楼2013-09-28 10:09:55
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普通回帖

longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
赵建雪: 金币+1 2013-12-22 20:27:11
1105mol/L氯化钠, 115%十六烷基三乙基溴化胺, 这个是真的吗？加点RNA酶处理一下就没有了。
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2楼2013-09-12 07:53:55
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA和RNA的很多性质都比较类似，在提取的时候，尽管不同的方法可能对其中一种有偏向性，但是不能完全的把另一种给完全排除。 所以提取完了，要对你不需要的进行处理。DNA中的RNA是最好除去的，加RNase就可以了。对于RNA中的DNA， 要用RNasefree的DNase来处理。
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4楼2013-09-12 16:02:32
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jiangleiyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
赵建雪: 金币+2 2013-12-22 20:28:54
甜樱桃DNA提取时，加样量一定要少一点，裂解液体积最好多一点，我们实验室一般都用的是1000ul。加样量多了反而会提不出DNA。
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5楼2013-09-18 20:25:03
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三只小老虎

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

再加一句：
加入等体积的酚∶氯仿(1∶1),
连续充分混匀10分钟，然后快速4度离心。
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7楼2013-09-28 10:12:23
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zdh707

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

药品24比1，离心再快一些，dna提取过程中会出现rna.
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待秋风再次吹起落叶，就算天空下起毛毛细雨，也不要在屋里偷懒，要去地里收白菜，刨红薯
8楼2013-10-14 23:18:56
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东湖雨

金虫 (正式写手)

http://bbs.freekaoyan.com/f

【答案】应助回帖

离心过程转速设置偏低
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【Fky】药学化学交流220843857；[FKYCHEM]化学考研交流108487998
9楼2013-10-28 01:05:09
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赵建雪

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longanzz at 2013-09-12 07:53:55
1105mol/L氯化钠, 115%十六烷基三乙基溴化胺, 这个是真的吗？加点RNA酶处理一下就没有了。

不好意思，复制的时候出错了
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自己的路只有自己能负责
10楼2013-12-22 20:27:00
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