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赵建雪

银虫 (正式写手)

[求助] 根据文献提DNA,但提出来却是RNA,为什么呀

根据甜樱桃DNA的快速提取法文献提DNA,但提出来却是RNA,为什么呀
在装有备用材料的115ml离心管中加入
500μl经过预热的十六烷基三乙基溴化胺
(CTAB)提取液,该提取液含pH810的75mmol/L
Tris- HCl缓冲液, pH810的115mmol/L乙二胺
四乙酸(EDTA), 1105mol/L氯化钠, 115%十六
烷基三乙基溴化胺, 2%β-巯基乙醇。置65℃
水浴中30分钟,加入等体积的酚∶氯仿(1∶1),
充分混匀,静置10分钟,在每分钟6000转的离
心机上离心5分钟,然后取上清液置于另一离心管中,加入2倍体积的无水乙醇和015倍体积
的5mol/L氯化钠,于- 20℃下放置15分钟后,
每分钟8000转离心5分钟, 弃上清液。用
70%乙醇洗DNA沉淀一次,风干,加100μl超
纯水溶解。取1μl上样,用018%琼脂糖凝胶
电泳检测DNA的质量和浓度。 提取后电泳图像如下图,后四个是提的样,樱桃
根据文献提DNA,但提出来却是RNA,为什么呀
IMG_20130911_171628.jpg
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gskekeai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
内容已删除
3楼2013-09-12 08:27:26
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三只小老虎

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有几个问题,你要注意,1、你的离心转速普遍过小,DNA沉淀不下去。一般我们都用12000rpm。2、你的电泳跑的时间过短,再多跑20分钟看看。3\加点rna酶处理一下。
一般提DNA,你要想保证产量的话,就尽可能的减少实验步奏,降低消耗。还有就是速度快,保持低温。
如果你的dna次生物质,如多糖,蒽,醌类较多的话,直接用试剂盒,速度快,产量高,还干净,可以用来做AFLP等酶切工作。
6楼2013-09-28 10:09:55
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普通回帖

longanzz

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
赵建雪: 金币+1 2013-12-22 20:27:11
1105mol/L氯化钠, 115%十六烷基三乙基溴化胺, 这个是真的吗?加点RNA酶处理一下就没有了。
2楼2013-09-12 07:53:55
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grape_vine

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
DNA和RNA的很多性质都比较类似,在提取的时候,尽管不同的方法可能对其中一种有偏向性,但是不能完全的把另一种给完全排除。 所以提取完了,要对你不需要的进行处理。DNA中的RNA是最好除去的,加RNase就可以了。对于RNA中的DNA, 要用RNasefree的DNase来处理。
4楼2013-09-12 16:02:32
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jiangleiyu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
赵建雪: 金币+2 2013-12-22 20:28:54
甜樱桃DNA提取时,加样量一定要少一点,裂解液体积最好多一点,我们实验室一般都用的是1000ul。加样量多了反而会提不出DNA。
5楼2013-09-18 20:25:03
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三只小老虎

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

再加一句:
加入等体积的酚∶氯仿(1∶1),
连续充分混匀10分钟,然后快速4度离心。
7楼2013-09-28 10:12:23
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zdh707

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

药品24比1,离心再快一些,dna提取过程中会出现rna.
待秋风再次吹起落叶,就算天空下起毛毛细雨,也不要在屋里偷懒,要去地里收白菜,刨红薯
8楼2013-10-14 23:18:56
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东湖雨

金虫 (正式写手)

http://bbs.freekaoyan.com/f

【答案】应助回帖

离心过程转速设置偏低
【Fky】药学化学交流220843857;[FKYCHEM]化学考研交流108487998
9楼2013-10-28 01:05:09
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赵建雪

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by longanzz at 2013-09-12 07:53:55
1105mol/L氯化钠, 115%十六烷基三乙基溴化胺, 这个是真的吗?加点RNA酶处理一下就没有了。

不好意思,复制的时候出错了
自己的路只有自己能负责
10楼2013-12-22 20:27:00
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