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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮分析一下，这个是不是说明C基因的引物产生二聚体了。
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月亮先生

金虫 (小有名气)

[求助] 大家帮分析一下，这个是不是说明C基因的引物产生二聚体了。

如图，提取RNA逆转录成cDNA之后用引物将cDNA给PCR出来的。最左边的三个孔忽略。P基因的目的产物长度为158bp,C基因的目的产物长度为193bp。P1、P2代表同一个基因得到的cDNA，引物相同，循环数相同，只是TM值不同。C1、C2代表相同基因得到的cDNA，引物相同，循环数相同，只是TM值不同。从图上看，是不是引物自身形成了发卡结构。或者引物1和引物2形成了二聚体，特别是C基因，最前边亮的那点跟maker前段的50bp相近，而C基因引物1和引物2的长度加起来是43bp。求指导，求分析。
大家帮分析一下，这个是不是说明C基因的引物产生二聚体了。
产物图片.jpg


大家帮分析一下，这个是不是说明C基因的引物产生二聚体了。-1
maker.jpg
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1楼 2013-09-03 23:03:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
月亮先生: 金币+8, ★★★★★最佳答案, 很好，谢谢前辈 2013-09-04 09:11:31
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 21:09:24
C基因P出来的产物里有明显的引物二聚体，可以试试降低引物浓度，提高退火温度。不行的话最好换引物。
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2楼2013-09-04 02:09:16
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grape_vine

金虫 (小有名气)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-04 21:09:29
同意楼上的.
另外,有个小建议.不管是胶图还是ladder的图,还是建议楼主以从上到下的方式来展示,这样方便大家看啊,你这个图大家都要扭着脖子......
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3楼2013-09-04 08:03:10
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月亮先生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-04 02:09:16
C基因P出来的产物里有明显的引物二聚体，可以试试降低引物浓度，提高退火温度。不行的话最好换引物。

可是我觉得P基因也还是有二聚体的。
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4楼2013-09-04 09:11:02
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月亮先生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by grape_vine at 2013-09-04 08:03:10
同意楼上的.
另外,有个小建议.不管是胶图还是ladder的图,还是建议楼主以从上到下的方式来展示,这样方便大家看啊,你这个图大家都要扭着脖子......

是哦，当时没有想到这一点，所以估计没有多少人参与讨论
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5楼2013-09-04 16:48:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 月亮先生 at 2013-09-04 09:11:02
可是我觉得P基因也还是有二聚体的。...

我觉得你的引物浓度有些高，经优化后还有引物二聚体的话最好是重新设计一下引物。
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6楼2013-09-05 01:27:47
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月亮先生

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-05 01:27:47
我觉得你的引物浓度有些高，经优化后还有引物二聚体的话最好是重新设计一下引物。...

好的谢谢前辈
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7楼2013-09-05 09:17:09
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