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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶切，连接，转化，已快崩溃
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sars37

捐助贵宾 (小有名气)

[交流] 酶切，连接，转化，已快崩溃

做TA克隆已经2个多月了，一开始出的问题是胶回收的浓度太低，后来发现不能按说明书上的做，看别人的文献同一个试剂都是离心1分钟的，说明书是离心30秒，好不容易回收率高一点，连接转化又不行，昨晚11点涂的板子，到现在才长出2、3个菌落，已经不报什么希望了，回收试剂盒都被我用完了，老板表示你做了这么久都做不出来，让我换课题，这都费心这么久了，说换就换了吗，我觉得我还可以抢救一下啊，决心自己花钱买个胶回收试剂盒，我觉得我能做出来！
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1楼 2013-09-03 14:35:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-06 17:39:42
引用回帖:
9楼: Originally posted by sars37 at 2013-09-03 20:44:40
对的 T质粒是买的，但是插入目的片段是自己做的，但是是师姐做的，现在师姐走了，我什么都不会。我老板一直不相信国内的试剂，所有基本上都买国外的，现在用的是QIAGEN的。...

qiagen的盒子质量很有保障的，我每次按照protocol做后胶回收的效率在50%以上。如果你的PCR产物只有一条带，可以不用胶回收，直接沉淀也可以的。再说连接也不用太多DNA片段，一般回收后的浓度在十到几十足够连接用了。
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15楼2013-09-04 03:12:55
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jlc0225

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
sars37: 金币+3 2013-09-03 20:44:52
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-03 20:57:21
一般说明书上写离心30S都得离心2min。耐心点，有时候需要搞清楚是什么试剂出了问题，有时是超纯水有问题。胶回收试剂盒是什么牌子的？是连接不行还是转化不行？祝实验顺利！
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3楼2013-09-03 15:34:49
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grape_vine

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这老板真是的,还真把这个当个课题了阿!
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4楼2013-09-03 16:52:01
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飞扬~~~

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by grape_vine at 2013-09-03 16:52:01
这老板真是的,还真把这个当个课题了阿!

？？？能够解释解释吗？
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5楼2013-09-03 17:20:17
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