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kl1112

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】如何分离提取食品中的游离氨基酸(氨基酸分析仪测定)

最近要做食品中的游离氨基酸的测定(采用氨基酸分析仪水解系统分析游离氨基酸)。
样品中含有蛋白质、多肽(低聚肽)、游离氨基酸、糖类(包括多糖类和纤维素)等。缓冲液和茚三酮溶液,以及仪器分析方法,都是仪器工程师提供的。

刚开始时,分别采用乙醇、磺基水杨酸、三氯乙酸来沉淀,离心,过滤膜,最后测出来的效果也都不好,杂质峰比较多。也试过用游离系统来做,效果更差。

我是刚接触氨基酸分析仪&氨基酸检测,没啥经验。
还请各位前辈们指教。先谢谢了。
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xdz1978

至尊木虫 (文坛精英)

持之以恒!

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kl1112: 金币+3, 有帮助 2013-08-19 10:55:03
一身正气,两袖清风,三餐温饱,四大皆空!
2楼2013-08-18 09:41:05
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35779270

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kl1112: 金币+3, 有帮助 2013-08-19 10:55:20
我也推荐国标《水果、蔬菜汁 游离氨基酸含量的测定》,但是上面很麻烦的要过阳离子交换树脂柱子的。你做的是什么样品,我原来测牛奶和葡萄酒中的游离氨基酸,用磺基水杨酸处理,用氨基酸分析仪测定,结果还可以的。多交流啊!
3楼2013-08-18 17:01:02
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kl1112

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xdz1978 at 2013-08-18 09:41:05
这个方法可以参考
http://www.tech-food.com/kndata/1000/0000560.htm

谢谢你的回复。
用“阳离子交换树脂”纯化,效果是比较好,这个我有考虑过,然而相应的操作也比较复杂耗时。另外,我检测中心就我一个人做,样品也比较多,而且我还要做其他项目检测,时间上不够呀,所以暂时不考虑这个方法,除非真的没有其他比较简单的方法。
4楼2013-08-19 09:17:36
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kl1112

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 35779270 at 2013-08-18 17:01:02
我也推荐国标《水果、蔬菜汁 游离氨基酸含量的测定》,但是上面很麻烦的要过阳离子交换树脂柱子的。你做的是什么样品,我原来测牛奶和葡萄酒中的游离氨基酸,用磺基水杨酸处理,用氨基酸分析仪测定,结果还可以的。 ...

相关的国标企标进出口的方法,我都看过了,大致就是用盐酸、磺基水杨酸、乙醇、三氯乙酸来沉淀提取,对于比较简单的样品还可以。对于复杂点的样品,增加阳离子交换树脂来纯化,效果会很好。

我做的样品是类似于麦片(就是配好的,可以直接冲的),有蛋白质、多肽(包括二聚三聚等可溶性低聚肽)、游离氨基酸、糖类(包括多糖和纤维素),还有一些不知什么的物质,就是成分比较杂。
我刚开始尝试用盐酸和磺基水杨酸来沉淀提取,可是离心过水膜后滤液依然很浑浊。
后来尝试用三氯乙酸和乙醇,离心过水膜后滤液就很清澈,但是图谱上显示很多杂峰(重叠到氨基酸峰了)。
5楼2013-08-19 09:28:40
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yhling157

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kl1112 at 2013-08-19 09:28:40
相关的国标企标进出口的方法,我都看过了,大致就是用盐酸、磺基水杨酸、乙醇、三氯乙酸来沉淀提取,对于比较简单的样品还可以。对于复杂点的样品,增加阳离子交换树脂来纯化,效果会很好。

我做的样品是类似于 ...

你用的三氯乙酸是多大浓度的?我想提取游离氨基酸,但是用磺基水杨酸提取没有沉淀,溶液是澄清的?

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6楼2016-07-19 20:12:05
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sheppard

木虫 (正式写手)

乙醇、磺基水杨酸、三氯乙酸 沉淀蛋白的效果是不错的,只是总会有些短肽、小结构蛋白无论如何处理都无法沉淀。这些短肽、小结构蛋白会影响最终出峰,比如肩峰、杂峰,分离度也不一定好。所以就算沉淀蛋白了,上清液还是要做一次酸解步骤,跑出来的结果就很好了。后来因为实验室危化试剂、高温设备等管理,做起来不方便,外面有机构做价格不高就都送样送检了,具体操作有疑问可以咨询扣扣3594231261,他们比较有经验
7楼2022-01-15 11:47:56
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