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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC分离氨基酸问题
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Julia0_0

新虫 (小有名气)

[求助] HPLC分离氨基酸问题已有1人参与

HPLC检测发酵液中氨基酸含量，用的是安捷伦C18 5μm 4.6*150mm柱，邻硝基苯磺酰氯做衍生剂，最开始做单个氨基酸标准样时都能出峰，但可以看出出峰时间比较接近。当讲单个标样混合再测时，就发现氨基酸都混在一起，只出来一个峰都没法分开了。。。想请教大家用什么办法能解决这一问题吗？

比如选用什么流动相，浓度、pH怎么选择，流速温度梯度如何设定等。帮帮我吧~
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1楼2012-07-11 20:19:25
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skenm

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+2, 感谢应助，欢迎常来分析版交流 ^ ^ 2012-07-12 09:47:31
氨基酸用普通HPLC不好做，如果你不是在线衍生的话就更不好做了，包括样品和衍生剂都太不稳定，做出来基本就是一坨峰，另外你发酵液水解了吗？要测游离氨基酸还是水解氨基酸，处理方法也不一样。
还是用专业氨基酸仪做吧，就算用氨基酸仪，很多样品做出来峰型也不理想的
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2楼2012-07-11 20:29:25
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+1, 用过这柱子吗，好用否？ 2012-07-12 09:48:04
楼主试试Agilent的AAA柱喃 这是一款专门的氨基酸测试柱
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3楼2012-07-11 20:44:02
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xbqewpq: 金币+3, 非常全面，感谢分享 2012-07-12 09:53:00
aglient有一个专门做氨基酸在线衍生的分析方法的，你看看应该对你有帮助
安捷伦氨基酸柱前衍生分析方法.pdf
http://kuai.xunlei.com/d/GUSJTLAXVDIZ?p=130497
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4楼2012-07-12 08:42:37
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swt1898

铁虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这方法台麻烦了，可以用氨基柱试试
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5楼2012-07-12 10:59:37
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32862500

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
氨基酸 在反相中出峰比较快，建议选择氨基酸柱 ，这样可以有一定的保留。 有保留才有分离的希望。
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6楼2012-07-12 11:20:14
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
调整流动相及pH入手，其次梯度入手，柱温可控40℃。需要慢慢调试摸索，没有一蹴而就。
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守候在风中的宁静。
7楼2012-07-12 14:07:42
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lifucheng at 2012-07-11 20:44:02
楼主试试Agilent的AAA柱喃 这是一款专门的氨基酸测试柱

我有同事用过 帮楼主问问哈
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8楼2012-07-12 19:41:08
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xiao49562000

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据氨基酸的等电点选择合适的ph，设置梯度洗脱的程序，多试试！祝顺利
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9楼2012-07-12 20:29:46
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Julia0_0

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by skenm at 2012-07-11 20:29:25
氨基酸用普通HPLC不好做，如果你不是在线衍生的话就更不好做了，包括样品和衍生剂都太不稳定，做出来基本就是一坨峰，另外你发酵液水解了吗？要测游离氨基酸还是水解氨基酸，处理方法也不一样。
还是用专业氨基酸仪 ...

用氨基酸仪做是不太可能了，老板不会同意。。。只好HPLC不断摸索了。。。
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10楼2012-07-13 20:47:59
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