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李战士

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白水解多肽样品游离氨基酸的测定

动物蛋白水解得到的多肽样品,想进行游离氨基酸的测定,使用蛋白质沉淀剂(如三氯乙酸)可能除去不掉小分子的肽类,进而会影响游离氨基酸的测定。请问大家有没有什么好方法,谢谢!
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其实有很多事我们都知道,只是不愿意说出来
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fengling5188

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
hsd3521: 回帖置顶 2012-07-17 20:11:25
李战士: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-07-18 00:19:03
磷钨酸(PTA)是一种极有辨别力的蛋白质沉淀剂,除氨基二羧酸外,所有的游离氨基酸都可在5 % PTA中溶解,但分子量大于600 DA的肽类则被沉淀出来。5 % PTA经常用在干酪中,想必在蛋白水解液中也可以使用。仅供参考下...
3楼2012-07-17 19:12:55
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
李战士: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢栋哥! 2012-07-18 00:19:17
HPLC-MS可以不?
或者双向电泳。。
太胖了!~
2楼2012-07-16 23:22:49
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李战士

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fengling5188 at 2012-07-17 19:12:55
磷钨酸(PTA)是一种极有辨别力的蛋白质沉淀剂,除氨基二羧酸外,所有的游离氨基酸都可在5 % PTA中溶解,但分子量大于600 DA的肽类则被沉淀出来。5 % PTA经常用在干酪中,想必在蛋白水解液中也可以使用。仅供参考下 ...

非常感谢!那这个磷钨酸应该如何除去呢?它的存在应该会影响氨基酸分析仪测定吧,正常是用0.02MHCl溶解的。
其实有很多事我们都知道,只是不愿意说出来
4楼2012-07-18 14:56:09
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fengling5188

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 李战士 at 2012-07-18 14:56:09
非常感谢!那这个磷钨酸应该如何除去呢?它的存在应该会影响氨基酸分析仪测定吧,正常是用0.02MHCl溶解的。...

常见用磷钨酸沉淀后,取上清液进行凯氏定氮,测其总游离氨基酸量。不知道其能否用于氨基酸分析仪测定种类。不过,文献中常用三氯乙酸沉淀后,用氨基酸分析仪测定,我也不太明白为什么。
5楼2012-07-19 08:58:39
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李战士

木虫 (正式写手)


hsd3521: 金币+1, 加油,走下液质连用不行吗? 2012-07-20 21:13:47
引用回帖:
5楼: Originally posted by fengling5188 at 2012-07-19 08:58:39
常见用磷钨酸沉淀后,取上清液进行凯氏定氮,测其总游离氨基酸量。不知道其能否用于氨基酸分析仪测定种类。不过,文献中常用三氯乙酸沉淀后,用氨基酸分析仪测定,我也不太明白为什么。...

氨基酸分析仪通常分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),我们现在想用前一个系统来测游离氨基酸,这个系统除了氨基酸最好只能有盐酸存在(后一个系统现在用不了,囧)。三氯乙酸处理沉淀蛋白后,我看有文献用的是HPLC测定的,用氨基酸分析仪我也确定不了了。。。
谢谢!!!
其实有很多事我们都知道,只是不愿意说出来
6楼2012-07-19 15:43:53
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飘渺尘埃

木虫 (小有名气)

楼主做完实验应该好久了吧,我想请教一下楼主您的做的动物蛋白水解,在水解之前是如何去脂肪的,动物蛋白水解之前需要什么样的前处理吗?
成功需要的条件很多,你我只需在一个条件下努力前行
7楼2013-09-25 14:19:51
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李战士

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘渺尘埃 at 2013-09-25 14:19:51
楼主做完实验应该好久了吧,我想请教一下楼主您的做的动物蛋白水解,在水解之前是如何去脂肪的,动物蛋白水解之前需要什么样的前处理吗?

我的那个蛋白没有脂肪,不好一起啊。

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其实有很多事我们都知道,只是不愿意说出来
8楼2013-09-26 12:40:57
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李战士

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘渺尘埃 at 2013-09-25 14:19:51
楼主做完实验应该好久了吧,我想请教一下楼主您的做的动物蛋白水解,在水解之前是如何去脂肪的,动物蛋白水解之前需要什么样的前处理吗?

我的那个蛋白没有脂肪,不好意思啊。

[ 发自小木虫客户端 ]
其实有很多事我们都知道,只是不愿意说出来
9楼2013-09-26 12:41:16
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飘渺尘埃

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 李战士 at 2013-09-26 12:41:16
我的那个蛋白没有脂肪,不好意思啊。
...

这样啊,没有不好意思的呵呵
成功需要的条件很多,你我只需在一个条件下努力前行
10楼2013-09-26 14:11:39
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