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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » 蛋白水解多肽样品游离氨基酸的测定
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李战士

木虫 (正式写手)

[求助] 蛋白水解多肽样品游离氨基酸的测定

动物蛋白水解得到的多肽样品，想进行游离氨基酸的测定，使用蛋白质沉淀剂（如三氯乙酸）可能除去不掉小分子的肽类，进而会影响游离氨基酸的测定。请问大家有没有什么好方法，谢谢！
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其实有很多事我们都知道，只是不愿意说出来
1楼 2012-07-16 18:51:24
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

火星驻地球联络处主任科员

优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
李战士: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢栋哥！ 2012-07-18 00:19:17
HPLC-MS可以不？
或者双向电泳。。
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太胖了！~
2楼2012-07-16 23:22:49
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fengling5188

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hsd3521: 回帖置顶 2012-07-17 20:11:25
李战士: 金币+15, ★★★★★最佳答案 2012-07-18 00:19:03
磷钨酸（PTA）是一种极有辨别力的蛋白质沉淀剂，除氨基二羧酸外，所有的游离氨基酸都可在5 % PTA中溶解，但分子量大于600 DA的肽类则被沉淀出来。5 % PTA经常用在干酪中，想必在蛋白水解液中也可以使用。仅供参考下...
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3楼2012-07-17 19:12:55
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李战士

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengling5188 at 2012-07-17 19:12:55
磷钨酸（PTA）是一种极有辨别力的蛋白质沉淀剂，除氨基二羧酸外，所有的游离氨基酸都可在5 % PTA中溶解，但分子量大于600 DA的肽类则被沉淀出来。5 % PTA经常用在干酪中，想必在蛋白水解液中也可以使用。仅供参考下 ...

非常感谢！那这个磷钨酸应该如何除去呢？它的存在应该会影响氨基酸分析仪测定吧，正常是用0.02MHCl溶解的。
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其实有很多事我们都知道，只是不愿意说出来
4楼2012-07-18 14:56:09
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fengling5188

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 李战士 at 2012-07-18 14:56:09
非常感谢！那这个磷钨酸应该如何除去呢？它的存在应该会影响氨基酸分析仪测定吧，正常是用0.02MHCl溶解的。...

常见用磷钨酸沉淀后，取上清液进行凯氏定氮，测其总游离氨基酸量。不知道其能否用于氨基酸分析仪测定种类。不过，文献中常用三氯乙酸沉淀后，用氨基酸分析仪测定，我也不太明白为什么。
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5楼2012-07-19 08:58:39
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李战士

木虫 (正式写手)
★
hsd3521: 金币+1, 加油，走下液质连用不行吗？ 2012-07-20 21:13:47
引用回帖:
5楼: Originally posted by fengling5188 at 2012-07-19 08:58:39
常见用磷钨酸沉淀后，取上清液进行凯氏定氮，测其总游离氨基酸量。不知道其能否用于氨基酸分析仪测定种类。不过，文献中常用三氯乙酸沉淀后，用氨基酸分析仪测定，我也不太明白为什么。...

氨基酸分析仪通常分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），我们现在想用前一个系统来测游离氨基酸，这个系统除了氨基酸最好只能有盐酸存在（后一个系统现在用不了，囧）。三氯乙酸处理沉淀蛋白后，我看有文献用的是HPLC测定的，用氨基酸分析仪我也确定不了了。。。
谢谢!!!
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其实有很多事我们都知道，只是不愿意说出来
6楼2012-07-19 15:43:53
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飘渺尘埃

木虫 (小有名气)
楼主做完实验应该好久了吧，我想请教一下楼主您的做的动物蛋白水解，在水解之前是如何去脂肪的，动物蛋白水解之前需要什么样的前处理吗？
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成功需要的条件很多，你我只需在一个条件下努力前行
7楼2013-09-25 14:19:51
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李战士

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘渺尘埃 at 2013-09-25 14:19:51
楼主做完实验应该好久了吧，我想请教一下楼主您的做的动物蛋白水解，在水解之前是如何去脂肪的，动物蛋白水解之前需要什么样的前处理吗？

我的那个蛋白没有脂肪，不好一起啊。

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其实有很多事我们都知道，只是不愿意说出来
8楼2013-09-26 12:40:57
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李战士

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 飘渺尘埃 at 2013-09-25 14:19:51
楼主做完实验应该好久了吧，我想请教一下楼主您的做的动物蛋白水解，在水解之前是如何去脂肪的，动物蛋白水解之前需要什么样的前处理吗？

我的那个蛋白没有脂肪，不好意思啊。

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其实有很多事我们都知道，只是不愿意说出来
9楼2013-09-26 12:41:16
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飘渺尘埃

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 李战士 at 2013-09-26 12:41:16
我的那个蛋白没有脂肪，不好意思啊。
...

这样啊，没有不好意思的呵呵
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成功需要的条件很多，你我只需在一个条件下努力前行
10楼2013-09-26 14:11:39
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