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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒电泳求助
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lijianfu12

银虫 (正式写手)

[交流] 质粒电泳求助 已有4人参与

本人菜鸟提了个质粒，载体是pMD™ 18-T Vector Cloning Kit，我的目的基因大概是2000bp左右！但今天用takara公司试剂盒提出质粒，跑电泳得到这样的图！按预期条带应该在5000bp的！求大神指点！谢谢。。。
质粒电泳求助
质粒电泳.png
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好好搞学术
1楼 2013-08-17 11:22:48
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-08-17 12:25:23
你这是什么marker啊，你的样品跑出的带是多大呢，如果远超过5K的话，就是gDNA!~
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-08-17 11:42:06
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
我的marker是15000的！那意思是我的目的片段没连上？

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好好搞学术
3楼2013-08-17 12:10:28
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-17 11:42:06
你这是什么marker啊，你的样品跑出的带是多大呢，如果远超过5K的话，就是gDNA!~

我用的是15000marker，gDNA？那意思是我的目的片段没有连上还是？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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好好搞学术
4楼2013-08-17 12:13:51
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
连T载体时，先做菌落PCR，挑PCR阳性克隆菌，再摇菌抽质粒，感觉是你的质粒提取的不好，即使没有连上也有空载的
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-08-17 12:26:28
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15879003030

铜虫 (小有名气)
★
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4楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-08-17 12:13:51
我用的是15000marker，gDNA？那意思是我的目的片段没有连上还是？
...

他的意思是如果片段大小远超5kb  就是基因组dna。

目的片段有没有连上你之前菌落PCR就应该可以验证到啊，验证完了再抽质粒肯定可以抽到东西的。  就看你抽质粒操作了。
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6楼2013-08-17 12:28:20
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
哦……谢谢

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好好搞学术
7楼2013-08-17 12:35:11
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gyesang at 2013-08-17 12:26:28
连T载体时，先做菌落PCR，挑PCR阳性克隆菌，再摇菌抽质粒，感觉是你的质粒提取的不好，即使没有连上也有空载的

菌液PCR能出来目的条带！

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好好搞学术
8楼2013-08-17 12:39:32
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-08-17 12:39:32
菌液PCR能出来目的条带！
...

那可能是你质粒提取的不好
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
9楼2013-08-17 12:50:50
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lijianfu12

银虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lijianfu12 at 2013-08-17 12:39:32
菌液PCR能出来目的条带！
...

谢谢哈！

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好好搞学术
10楼2013-08-17 15:08:54
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