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shiliyusly新虫 (小有名气)
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QPCR之数据处理
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大家好，我在做QPCR对于仪器自动设定的荧光阈值有点困惑，想请教下高手。 我用的是Stratagene mx3000p QPCR仪。 1 完全相同的东西，仪器2次做给的荧光阈值不同； 2 不同基因一起做，将2个基因全选中读取数据时给的荧光阈值是相同的，但是如果单个基因分开选中荧光阈值不同。 我研究的是不同成熟度杨梅的特定基因的表达差异，必须保证同个基因的不同样品荧光阈值相同，这样可以分析该基因的表达差异。但是不能比较不同基因之间的表达差异，因为不同基因荧光阈值仪器设定的不同。是这样吗？ 如果我在上面的基础，加上不同品种杨梅的比较，2个品种的杨梅5个成熟度A基因表达差异比较，仪器分2次做，一次一个品种，由于仪器设定的荧光阈值不同，是要先调成一致吗？手调的话可能不是在阈值合适的位置，查资料是说要在3-15个循环偏差的10倍。 下面的图是仪器上的阈值设置选项，好像不是所说的3-15个循环偏差的10倍，看不懂，麻烦高手指点啊！感激不尽！！！  psb.jpg  IMG20130810171714.jpg [ Last edited by shiliyusly on 2013-8-10 at 22:14 ] |
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2楼2013-09-29 10:37:55
hl16010921
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