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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于SDS-PAGE和WB的问题
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liangjuan2007

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于SDS-PAGE和WB的问题

我做SDS-PAGE和WB时得到24KDa和14kDa两条较明显的带，把这两条带做质谱分析，结果是同一种蛋白，分子量39kDa，是一种糖蛋白。很多文献都说这种39kDa的蛋白是一条肽链组成的B螺旋结构，含有二硫键。请问我做SDS-PAGE和WB的合理吗？
    难道是变性时使蛋白变成两条链了？还是说糖链脱除了，还是其他原因？为什么SDS是24kDa和14kDa？而两条带质谱分析结果都是39kDa，且同一种蛋白呢？
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1楼 2013-07-29 19:16:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2013-07-30 08:03:32
文献上说的蛋白与你做的是同一个物种吗？你查一下你做的物种39KD蛋白是否是由两条多肽表达用分子间二硫键连接的。
回答楼上的问题，SDS-PAGE定分子量虽然不是很精确，但完全可以区分三十多、二十多还是十多KD的蛋白。
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3楼2013-07-29 23:24:51
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shi16

银虫 (小有名气)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-30 09:28:38
弱弱的问一句。WB得到的蛋白长能精确到个位数？
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2楼2013-07-29 21:21:43
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+3, 谢谢参与 2013-07-30 08:03:38
liangjuan2007: 金币+2 2013-08-01 09:10:43
仔细检查一下质谱结果，如果我估计的没错的话是多聚体的原因（因为有二硫键）
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-07-30 01:25:40
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-30 09:28:53
liangjuan2007: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-07-30 14:55:43
考虑是否聚体。查查文献看一下聚体存在的条件，是否和你纯化的条件有交叉。
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5楼2013-07-30 09:14:53
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