| 查看: 1575 | 回复: 13 | ||||
qlw4567铁杆木虫 (著名写手)
|
[求助]
求助——SDS-PAGE的问题
|
|||
如图，我跑的胶好几次都是这样。。。。。上面从下到上分别是3个BSA，3个OVA，1个LYZ，1个分子量标记。可以我做的全是一片模糊。不明白为什么，我前几次也出现过这个现象。求大哥大姐们帮忙~~~   432_395284000_IMG_0269.JPG [ Last edited by 1949stone on 2013-7-19 at 08:10 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有296人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE的问题请教，大家帮帮忙啊！求高手啊！
已经有14人回复
- 急求：聚丙烯酰胺电泳点样孔之间相互串样
已经有19人回复
- 紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？
已经有9人回复
- tricine-SDS-PAGE配胶的3C 6C储备液配制问题
已经有7人回复
- Tricine-SDS-PAGE电泳问题求助。急！！！
已经有12人回复
- 怎么回答呀，急，急，急！
已经有9人回复
- 【求助】急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！
已经有32人回复
- 【求助/交流】请教蛋白质纯化实验遇到的麻烦！！！急急
已经有3人回复
- 【求助/交流】电泳分离胶pH的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于SDS-PAGE的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】急！！！SDS-PAGE后蛋白质复性方法
已经有8人回复
- 【求助/交流】请教，SDS-PAGE的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】急！SDS-page电泳成像
已经有9人回复
myprayer
专家顾问 (著名写手)
- MolEPI: 12
- 应助: 81 (初中生)
- 贵宾: 2.822
- 金币: 32408.7
- 散金: 1696
- 红花: 159
- 沙发: 3
- 帖子: 2275
- 在线: 822.5小时
- 虫号: 1759711
- 注册: 2012-04-16
- 专业: 生物力学与生物流变学
- 管辖: 生物医药区
12楼2013-07-21 12:05:07
kx444555
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 贵宾: 1.326
- 金币: 10554.2
- 散金: 288
- 红花: 12
- 帖子: 820
- 在线: 238小时
- 虫号: 999718
- 注册: 2010-04-18
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2013-07-12 11:16:58
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-07-12 11:52:05
qlw4567: 金币+5, ★有帮助, 您这个回答，我在网上其他地方也看过，首先，缓冲溶液是按照网上的配方来的，pH都由pH计测试过。第二，我的样品溶解液配方为SDS100mg，巯基乙醇0.1mL，甘油1mL，溴酚蓝2mg，0.2mol/Lph7.2磷酸缓冲液0.5mL，然后加水定容至10mL。再就是电极方向的问题，我电极安装应该没有问题，因为我也做出来过正常现象的凝胶。我的染色液是0.25g的考马斯亮蓝，454的50%的甲醇和46mL的冰乙酸。然后我一般泡30min左右。电泳时间一般跑到底要8个小时。但是我的板子很大，是20cm的板。 2013-07-12 15:40:33
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+5, 鼓励交流 2013-07-12 11:52:05
qlw4567: 金币+5, ★有帮助, 您这个回答，我在网上其他地方也看过，首先，缓冲溶液是按照网上的配方来的，pH都由pH计测试过。第二，我的样品溶解液配方为SDS100mg，巯基乙醇0.1mL，甘油1mL，溴酚蓝2mg，0.2mol/Lph7.2磷酸缓冲液0.5mL，然后加水定容至10mL。再就是电极方向的问题，我电极安装应该没有问题，因为我也做出来过正常现象的凝胶。我的染色液是0.25g的考马斯亮蓝，454的50%的甲醇和46mL的冰乙酸。然后我一般泡30min左右。电泳时间一般跑到底要8个小时。但是我的板子很大，是20cm的板。 2013-07-12 15:40:33
|
提示五点： 1.缓冲溶液配好了吗？ 在SDS-PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低;而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。 样品如何处理? 2.样品处理的怎么样？ 根据样品分离目的不同，主要有三种处理方法：还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理。 （1）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。一般电泳均按这种方式处理，样品稀释适当浓度，加入上样Buffer，离心，沸水煮5min，再离心加样。 （2）带有烷基化作用的还原SDS处理：碘乙酸胺的烷基化作用可以很好的并经久牢固的保护SH基团，得到较窄的谱带;另碘乙酸胺可捕集过量的DTT，而防止银染时的纹理现象。100μl样品缓冲液中10μl 20%的碘乙酸胺，并在室温保温30min。 （3）非还原SDS处理：生理体液、血清、尿素等样品，一般只用1%SDS沸水中煮3min，未加还原剂，因而蛋白折叠未被破坏，不可作为测定分子量来使用。 3.电极方向对了吗？ 4.染色程序对不对？ 5.电泳时间是不是长了？ |
3楼2013-07-12 11:49:19
qlw4567
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 9363.2
- 散金: 686
- 红花: 8
- 帖子: 1176
- 在线: 106.5小时
- 虫号: 1189211
- 注册: 2011-01-13
- 性别: GG
- 专业: 功能与智能高分子
4楼2013-07-12 15:31:12
qlw4567
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 9363.2
- 散金: 686
- 红花: 8
- 帖子: 1176
- 在线: 106.5小时
- 虫号: 1189211
- 注册: 2011-01-13
- 性别: GG
- 专业: 功能与智能高分子
5楼2013-07-12 15:47:33
yangdayuan
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 918.2
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 103
- 在线: 82.3小时
- 虫号: 1433361
- 注册: 2011-10-09
- 性别: GG
- 专业: 金属结构材料
6楼2013-07-12 16:04:14
yangdayuan
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 918.2
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 103
- 在线: 82.3小时
- 虫号: 1433361
- 注册: 2011-10-09
- 性别: GG
- 专业: 金属结构材料
7楼2013-07-12 16:04:56
qlw4567
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 9363.2
- 散金: 686
- 红花: 8
- 帖子: 1176
- 在线: 106.5小时
- 虫号: 1189211
- 注册: 2011-01-13
- 性别: GG
- 专业: 功能与智能高分子
8楼2013-07-12 16:47:09
qlw4567
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 48 (小学生)
- 金币: 9363.2
- 散金: 686
- 红花: 8
- 帖子: 1176
- 在线: 106.5小时
- 虫号: 1189211
- 注册: 2011-01-13
- 性别: GG
- 专业: 功能与智能高分子
9楼2013-07-12 17:07:20
★
qlw4567(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-21 12:02:31
qlw4567(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-21 12:02:31
|
本帖内容被屏蔽 |
10楼2013-07-18 17:02:18
