应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Western配胶的问题
61/1返回列表
查看: 2589  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

亲爱的景景

新虫 (初入文坛)

[求助] Western配胶的问题

我最近做western的时候，配胶这一块很让人头疼，不管是12%还是15%的胶都分的不是很开，特别是15到10kb完全没有分开。检查了配方什么都没有问题，配胶的那套溶液也都是按照分子克隆书上的配方新配的，可不知道为什么就是分不开，以前不会这样。各位大神谁能帮帮我？你们的配方都是多少？找不到原因好郁闷的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-26 15:07:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是KD不是Kb吧，12%的胶应该没有问题的啊，你把所有配胶的buffer都换新的。
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-07-26 15:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亲爱的景景

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-26 15:09:23
是KD不是Kb吧，12%的胶应该没有问题的啊，你把所有配胶的buffer都换新的。

那你知道不同浓度的分离胶可以分开的蛋白的分子量的范围吗？
是否可以告知？
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-26 15:40:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
亲爱的景景(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-26 17:42:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by 亲爱的景景 at 2013-07-26 15:40:57
那你知道不同浓度的分离胶可以分开的蛋白的分子量的范围吗？
是否可以告知？...

百分比    KD
15   15-45
12.5   15-60
10   18-75
7.5   30-120
5   60-212
我也背不下来，网上刚查的~~我们以前一般15-60kd的都用10-12的
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
4楼2013-07-26 16:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-07-27 11:28:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般跑胶不用像下面这样，但低分子量的例外。
所有试剂包括电泳缓冲液都换新的，把池子也洗干净。
包括AP也要全新的，否则凝固太慢影响低分子量的聚焦。
玻璃片要去离子水洗干净擦干再用。灌胶架也要洗干净。
上样要薄，我喜欢用GelLoader枪头
电泳温度很重要，别吝惜冰块。
做得极致一点更好找到问题的原因。
以上是我的经验，在分离十几K的三条组蛋白的时候可以达到4-20%梯度胶的聚焦效果。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-27 21:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 亲爱的景景 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-17 12:39 by ObVzqQQh1rrE
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:16 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-17 05:14 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-17 04:16 by k06BKNblrGRH
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-17 03:16 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-17 03:14 by Tql5LQhh5rLK
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-17 02:14 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 8/400 2026-09-17 01:38 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:00 by i3KBRD19ERkG
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组｜2027级博士研究生招生公告 +7 水士口 2026-09-16 8/400 2026-09-16 13:47 by kkklens
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭