应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Western配胶的问题
61/1返回列表
查看: 2338  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

亲爱的景景

新虫 (初入文坛)

[求助] Western配胶的问题

我最近做western的时候，配胶这一块很让人头疼，不管是12%还是15%的胶都分的不是很开，特别是15到10kb完全没有分开。检查了配方什么都没有问题，配胶的那套溶液也都是按照分子克隆书上的配方新配的，可不知道为什么就是分不开，以前不会这样。各位大神谁能帮帮我？你们的配方都是多少？找不到原因好郁闷的。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-26 15:07:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是KD不是Kb吧，12%的胶应该没有问题的啊，你把所有配胶的buffer都换新的。
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
2楼2013-07-26 15:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

亲爱的景景

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by loveskyzhou at 2013-07-26 15:09:23
是KD不是Kb吧，12%的胶应该没有问题的啊，你把所有配胶的buffer都换新的。

那你知道不同浓度的分离胶可以分开的蛋白的分子量的范围吗？
是否可以告知？
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-26 15:40:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
亲爱的景景(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-26 17:42:17
引用回帖:
3楼: Originally posted by 亲爱的景景 at 2013-07-26 15:40:57
那你知道不同浓度的分离胶可以分开的蛋白的分子量的范围吗？
是否可以告知？...

百分比    KD
15   15-45
12.5   15-60
10   18-75
7.5   30-120
5   60-212
我也背不下来，网上刚查的~~我们以前一般15-60kd的都用10-12的
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
4楼2013-07-26 16:38:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-07-27 11:28:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般跑胶不用像下面这样，但低分子量的例外。
所有试剂包括电泳缓冲液都换新的，把池子也洗干净。
包括AP也要全新的，否则凝固太慢影响低分子量的聚焦。
玻璃片要去离子水洗干净擦干再用。灌胶架也要洗干净。
上样要薄，我喜欢用GelLoader枪头
电泳温度很重要，别吝惜冰块。
做得极致一点更好找到问题的原因。
以上是我的经验，在分离十几K的三条组蛋白的时候可以达到4-20%梯度胶的聚焦效果。
赞一下 回复此楼
6楼2013-07-27 21:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 亲爱的景景 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-15 6/300 2026-03-16 08:00 by wang_dand
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 326求调剂 +3 上岸的小葡 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:50 by 无际的草原
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +11 enenenhui 2026-03-13 12/600 2026-03-14 21:48 by laoshidan
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 337一志愿华南理工材料求调剂（有希望2吗？） +3 mysdl 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:53 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 326 求调剂 +5 热爱生活ing 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:39 by JourneyLucky
[考研] 328，0703考生求调剂，一志愿为东北师范大学 +4 观素律 2026-03-09 5/250 2026-03-14 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿郑大070303，338分，求调剂 +4 dadawaf 2026-03-10 5/250 2026-03-14 01:20 by lsw010101
[考研] 调剂 +3 13853210211 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:47 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 0703化学调剂 +4 快乐的香蕉 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:41 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 0703一志愿211 285分求调剂 +4 ly3471z 2026-03-13 4/200 2026-03-13 13:00 by JourneyLucky
[考研] 268求调剂 +4 好运连绵不绝 2026-03-12 4/200 2026-03-13 10:45 by hyswxzs
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭