应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 怎么做实时定量pcr？
51/1返回列表
查看: 2239  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Jianxiao_H

金虫 (正式写手)

[求助] 怎么做实时定量pcr？

吐槽一句：学姐什么都不懂！！

现在有某昆虫的转录组测序结果，也筛选出功能基因了。
想做定量pcr，比较功能基因在该昆虫不同龄期的表达规律。
该怎么开始？
序列有有多，我要从哪里开始试剂引物？
选TaqMan荧光探针还是SYBR荧光染料？如果用探针是不是还要设计探针啊？
选什么做内参基因？应该是要选一个在不同年龄阶段均表达稳定的基因吧。18S rRNA可以么？
还有能不能给我解释一下，外标法和外参法有什么区别、内标法，内参等等这些易混淆的概念。
谢谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
多少辛酸不可告人。
1楼 2013-07-25 17:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jianxiao_H

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by biomed_fanyi at 2013-07-26 11:58:08
引物设计可以用invitrogen的网站上那个，具体我忘了什么名字，你搜一下就应该看到。

行，我去看看。
回复此楼
多少辛酸不可告人。
5楼2013-07-26 13:02:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

changes

木虫 (正式写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-25 20:57:16
是在不懂的话还是多看文献吧，尤其是类似的材料的qRT-PCR。

文献就是开始的第一步。

如果只是对一些基因进行不同发育期的表达谱分析，建议利用荧光染料做，当然对于非常感兴趣要进行下游其它的研究的话可以设计个TaqMan探针(此时内参基因也要利用TaqMan探针标记)。

至于内参基因的选择也是利用文献先检索吧，如果实在是没有相关文献，那么光确定一个内参基因就是一篇文章了。

其它的问题还是先看文献吧。有人认为很简单，细致起来很繁琐。
赞一下 回复此楼
2楼2013-07-25 20:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jianxiao_H

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by changes at 2013-07-25 20:17:41
是在不懂的话还是多看文献吧，尤其是类似的材料的qRT-PCR。

文献就是开始的第一步。

如果只是对一些基因进行不同发育期的表达谱分析，建议利用荧光染料做，当然对于非常感兴趣要进行下游其它的研究的话可以设 ...

现在文献看了一些了，有点眉目了。
这些东西对我来说还是很陌生的，受启发了。谢谢。
赞一下 回复此楼
多少辛酸不可告人。
3楼2013-07-26 11:22:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物设计可以用invitrogen的网站上那个，具体我忘了什么名字，你搜一下就应该看到。
赞一下 回复此楼
4楼2013-07-26 11:58:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 19:50 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 5/250 2026-11-10 19:45 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 3/150 2026-11-10 16:43 by G2rhSvqvhNzl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 3/150 2026-11-10 16:32 by G2rhSvqvhNzl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 12:30 by C6CRn66RYYXS
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:46 by YHiw1gou1Eda
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 11:02 by YHiw1gou1Eda
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 4/200 2026-11-10 10:51 by YHiw1gou1Eda
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 4/200 2026-11-10 01:29 by FChKX8meu1ds
[考博] 27博士申请 +3 白白白ly 2026-11-09 3/150 2026-11-09 21:39 by szq0819
[文学芳草园] 厉娜 +3 张丹枫1991 2026-11-09 5/250 2026-11-09 16:53 by 张丹枫1991
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 15/750 2026-11-09 11:41 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-08 23:01 by l48hFd8Nwae2
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭