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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果分析
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夏橙秋蜜

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR结果分析

求助，谁能帮我分析下，我做的PCR为什么条带很暗，需不需要把退火温度给降低下？
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  • 附件 1 : 2013.7.20引物3，材料3，56度检测.tif
    • 2013-07-21 15:15:18, 669.77 K

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1楼 2013-07-21 15:16:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
夏橙秋蜜(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:06:50
引物二聚体比较多，说明PCR效果不好。除了引物二聚体以外还有几条带，目的条带是最亮的那条吗？此外，你用什么模板P的，模板用量是否合适？
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2楼2013-07-21 21:31:13
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-22 11:48:10
我不知道你的目的条带为多大，但很明显你存在非特异条带，而且具体比mark还浅，所以强烈建议适当拔高退火温度，最后做个TD PCR. PS：只有有目的条带说明你的模板就没有问题！Good luck！
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互助互励，共奋共进！！
3楼2013-07-22 05:49:51
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夏橙秋蜜

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 21:31:13
引物二聚体比较多，说明PCR效果不好。除了引物二聚体以外还有几条带，目的条带是最亮的那条吗？此外，你用什么模板P的，模板用量是否合适？

是，但还是效果不好，可能是引物特异性不好，模板是DNA，量还行
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4楼2013-08-31 20:45:02
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 夏橙秋蜜 at 2013-08-31 20:45:02
是，但还是效果不好，可能是引物特异性不好，模板是DNA，量还行...

杂带多可能需要适当升高退火温度。此外，不要加太多模板。
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5楼2013-08-31 23:02:26
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