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飘洋2008

木虫 (著名写手)

应助: 3 (幼儿园)
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散金: 20
红花: 5
帖子: 1126
在线: 429.3小时
虫号: 952207
注册: 2010-02-04
性别: GG
专业: 细胞增殖、生长与分化

[求助] 载体构建问题

本人初次做分子生物学，想将一目的基因约500bp,构建到PBI121载体上，计划先将目标片段加上酶切位点后连接到T载体上，再经双酶切后连到PBI121载体上，连到T载体后才发现酶切位点设计有问题，我设的酶切位点是XbaI/SacI，T载体上也有XbaI/SacI酶切位点，没办法完整切下目标片段，现在我该怎么做？能不能讲目标片段胶回收后直接连到经双酶切后连到PBI121载体上？请哪位高手能指点迷津，本人将不胜感激！

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1楼 2013-07-19 17:26:34

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飘洋2008

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by lillian菲 at 2013-07-20 10:09:22
同意楼上的，不用连接在T载体上了，设计了带酶切位点的上下游引物，要切记设计的酶切位点在PBI121载体上的多克隆位点处，且只能有一个酶切位点，不会切断原质粒。直接连接在PBI121上就可以了，很容易的啊（T载体不用 ...

你的意思是将设计了酶切位点的PCR产物不用再做酶切，直接连接在PBI121酶切回收的大片段上就可以了吗？