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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助荧光定量引物验证？
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wzc4884

金虫 (正式写手)

[求助] 求助荧光定量引物验证？

大家好，最近做了关于荧光定量PCR的文章，在做荧光定量PCR的时候，设计了一个引物，审稿人提出意见说建议我重新设计引物，也就是怀疑我的引物有问题。我不解的是，我做熔解曲线是单峰，而且通过电泳和熔解曲线都说明，引物特异性很好啊（只是文章中我没有将熔解曲线的图附上），我为了验证引物的特异性，我又对PCR产物进行测序分析，比对结果发现，与目的序列的同源性很高。我想使用熔解曲线和测序结果可以回答审稿人问题了吗？谢谢大家赐教！
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1楼 2013-07-14 23:56:56
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wzc4884

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-15 01:35:02
你先仔细检查一下审稿人为什么说你的引物不行，需要重新设计。如果的确是怀疑引物的特异性，你自己确定引物没有问题，可以用熔解曲线和测序结果来回答审稿人的问题。

您好，谢谢，我得到的熔解曲线确实很好，而且有测序结果，这样应该能回答审稿人了吧，我怕审稿人再提出刁钻的问题，呵呵，谢谢
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4楼2013-07-15 16:34:10
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wzc4884(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-07-15 10:45:48
你先仔细检查一下审稿人为什么说你的引物不行，需要重新设计。如果的确是怀疑引物的特异性，你自己确定引物没有问题，可以用熔解曲线和测序结果来回答审稿人的问题。
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2楼2013-07-15 01:35:02
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-15 10:46:06
如果你确定你的引物特异性很好并且能拿出令人信服的实验数据就可以回答他的问题。
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3楼2013-07-15 07:36:11
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