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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] DNA的提取和纯化

各位高手好,这几天我在用CTAB法提取DNA,可是最后发现提取的DNA用TE稀释完之后有点粘稠,所以想用25:24:1纯化一下,可是不知道该怎么操作,是需要从加CTAB 开始再重复一遍实验流程吗?还是直接加CTAB?我是着直接加了CTAB,混匀之后离心完发现没办法取上清,因为上清只有一点点,根本取不起来,这可该怎么办啊?》求各位高人指点啦!
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-13 13:25:22
抽提后离心所得上清加入0.1体积3N NaAc(最好是pH5.2的)和2.5体积的无水乙醇混匀后,-20度或室温放置15min以上再12000gX15min收集DNA。
伟大航线....
10楼2013-07-12 09:15:02
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-10 22:33:07
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2013-07-11 12:34:09
粘稠可能是因为浓度太高了。只要质量高,就没没事。可以跑胶看下条带的质量,是否是一条带,有无降解,最好测个浓度。。如果想纯化,可以从25:24:1开始。
2楼2013-07-10 22:02:36
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protura

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2013-07-11 12:34:41
建议过离心柱纯化。
3楼2013-07-10 22:38:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-11 12:21:59
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2013-07-11 12:32:01
样品定量或者跑胶观察了吗?浓度高的DNA溶液也是很粘的。如果只是浓度高,溶解不充分,可以多加点TE稀释一下。
4楼2013-07-11 07:08:47
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