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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA的提取和纯化
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崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] DNA的提取和纯化

各位高手好，这几天我在用CTAB法提取DNA，可是最后发现提取的DNA用TE稀释完之后有点粘稠，所以想用25:24:1纯化一下，可是不知道该怎么操作，是需要从加CTAB 开始再重复一遍实验流程吗？还是直接加CTAB?我是着直接加了CTAB,混匀之后离心完发现没办法取上清，因为上清只有一点点，根本取不起来，这可该怎么办啊？》求各位高人指点啦!
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每个人都有心底最柔软的地方，请不要触碰它，因为每个人都有自己的尊严！
1楼 2013-07-10 21:54:14
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protura

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-07-11 12:34:41
建议过离心柱纯化。
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3楼2013-07-10 22:38:40
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-10 22:33:07
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-07-11 12:34:09
粘稠可能是因为浓度太高了。只要质量高，就没没事。可以跑胶看下条带的质量，是否是一条带，有无降解，最好测个浓度。。如果想纯化，可以从25:24:1开始。
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2楼2013-07-10 22:02:36
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-11 12:21:59
崔永霞: 金币+2, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2013-07-11 12:32:01
样品定量或者跑胶观察了吗？浓度高的DNA溶液也是很粘的。如果只是浓度高，溶解不充分，可以多加点TE稀释一下。
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4楼2013-07-11 07:08:47
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励新虫交流 2013-07-11 12:22:07
崔永霞: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 非常感谢！ 2013-07-11 12:31:40
粘稠有两种可能：
一是提的DNA浓度高，二是有一些杂质（例如多糖等）也会导致粘稠。
如果是一的情况那可以多加点TE稀释。[可测OD或电泳看看]
如果是二的情况则把DNA先稀释至约300-400ul，然后加用有机溶剂抽提一次。再抽提一次对去除杂质有一定帮助。
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伟大航线....
5楼2013-07-11 08:46:53
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