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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Marker跑不开是怎么回事啊
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forever909

银虫 (小有名气)

[求助] Marker跑不开是怎么回事啊

最近在做WB，一开始时候一直做的是大分子量的蛋白(220)现在要做小分子量的蛋白（25）才发现我的marke跑不开的，就是14-100的marker最下面的那两个条带总是黏在一起，我的实验条件伯乐的电泳仪，60V，2h，marker上样5ul，胶的浓度10%，12%都试过了，Bic，AP都是重新配的，请各位帮帮忙，看看是什么问题，等着结果毕业了，在这先谢谢了
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快乐是最重要的。。。。。。
1楼 2013-07-10 09:10:53
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lifuzhu3838

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-12 01:38:26
我经常跑小分子的蛋白，用15%的胶，分离胶时电压加大一点100V-120V，电泳液重新配制，肯定分离的好。
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活到老学到老
7楼2013-07-10 10:58:42
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416114799

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
① 胶浓度太高；② 电压太低。。
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做人做事要低调,默默践行心中的梦想.
8楼2013-07-10 11:34:13
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普通回帖

bleach060452

新虫 (小有名气)
既然等着这个结果毕业，可以换个牌子的marker试试
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岂能尽如人意，但求无愧我心
2楼2013-07-10 09:31:56
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forever909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bleach060452 at 2013-07-10 09:31:56
既然等着这个结果毕业，可以换个牌子的marker试试

我觉得应该不是marker的问题，因为实验室其他的人说她的可以跑开的
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快乐是最重要的。。。。。。
3楼2013-07-10 09:42:19
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zhsha1993

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很有肯能是缓冲液的问题 自己重新配
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4楼2013-07-10 10:14:17
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bleach060452

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by forever909 at 2013-07-10 09:42:19
我觉得应该不是marker的问题，因为实验室其他的人说她的可以跑开的...

她说可以跑开，究竟跑成什么样，你亲自看了没有？

你说的25是KD？我原来跑17 KD的，marker分的挺好的
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岂能尽如人意，但求无愧我心
5楼2013-07-10 10:15:18
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微笑莫凝汐

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
marker跑不开有可能是缓冲液的原因 还有就是你配的胶的浓度不对
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6楼2013-07-10 10:49:45
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-11 12:22:40
用15%的胶，堆积胶90V，分离胶120V，应该问题不大，我用12%的也可以分开。要是有条件用5%或7%～20%的梯度胶更好。
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9楼2013-07-11 08:12:55
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guomimi

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
跑胶时间，胶浓度，缓冲液更换新的，注意浓度，电压，电流。
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10楼2013-07-11 15:01:19
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