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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大肠杆菌转化 是热击法转化效率高还是电转化效率高
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honey倩

铜虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌转化 是热击法转化效率高还是电转化效率高

各位，做大肠杆菌转化的时候
热击转化的转化效率高，还是电转化效率高
最近做DH5α的转化，转了几次都没转进去，做的热击转化，转化的是连接体系 10ul
pUC19单酶切 去磷酸化 又连了一个片段，片段比较 >1.3kb,不清楚是什么原因，各位交流一下，谢谢
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当你的眼泪忍不住要流出来的时候，睁大眼睛，千万别眨眼，你会看到世界由清晰到模糊的全过程~~
1楼 2013-07-08 10:47:27
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dcb005

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖应助！ 2013-07-10 00:58:00
honey倩: 金币+1, ★有帮助 2013-08-27 18:00:28
电转效率高些，但你的情况片段不是很大，热击转化一点问题没有，觉得可能是酶切连接，或者磷酸化出了问题
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★穷则独善其身,达则兼济天下★
2楼2013-07-08 12:01:26
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lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 很对！ 2013-07-10 00:58:16
大肠杆菌一般用热击法，
酵母的一般用电转化法。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
3楼2013-07-08 13:41:41
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-10 00:58:32
估计是感受态细胞的问题
天气热，运输中间如果有问题，就很难保证质量了。
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4楼2013-07-08 13:51:55
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-08 14:13:12
honey倩: 金币+2 2013-08-27 18:00:55
单从效率上说是点转化效率高。不过，如果不是转化特别大的片段，大肠杆菌用熱激都会有很多克隆的。我也认为转化失败的原因是酶切和连接的问题。酶切反应是否完全，载体和目的片段酶切回收后是否做了定量？
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5楼2013-07-08 13:54:47
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xikexiao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2013-07-08 17:14:58
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honey倩

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yuzhiming at 2013-07-08 13:51:55
估计是感受态细胞的问题
天气热，运输中间如果有问题，就很难保证质量了。

我们感受态是自己做的，前一阵他们做的还是没问题的，我也没新做，有三个月了吧
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当你的眼泪忍不住要流出来的时候，睁大眼睛，千万别眨眼，你会看到世界由清晰到模糊的全过程~~
7楼2013-07-09 15:03:50
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yuzhiming

捐助贵宾 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2013-07-10 00:58:53
引用回帖:
7楼: Originally posted by honey倩 at 2013-07-09 15:03:50
我们感受态是自己做的，前一阵他们做的还是没问题的，我也没新做，有三个月了吧...

关键还是要看你的感受态制作方法，及操作步骤的。
或者你直接拿一个空载体做阳性对照看看！
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8楼2013-07-09 22:16:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by honey倩 at 2013-07-09 15:03:50
我们感受态是自己做的，前一阵他们做的还是没问题的，我也没新做，有三个月了吧...

每次转化时尽量做下正负对照，便于分析结果。
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9楼2013-07-10 00:55:59
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honey倩

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xikexiao at 2013-07-08 17:14:58
问一下，“转了几次都没转进去”是平板上不长菌还是长了之后验证不正确

是直接不长菌，一个菌都没有
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当你的眼泪忍不住要流出来的时候，睁大眼睛，千万别眨眼，你会看到世界由清晰到模糊的全过程~~
10楼2013-07-11 16:41:34
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