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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 不热激，可否转化？
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wyz4626

银虫 (小有名气)

[交流] 不热激，可否转化？ 已有14人参与

昨天转化前，一走神，忘了热激就摇上了。我一咬牙继续做了，不知能否长出来？
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1楼 2012-06-04 08:23:38
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回帖置顶 ( 共有2个 )

dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 专业，我也学习了 2012-06-04 16:31:36
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物，黏附在胞膜的外表面；42 ℃热激处理，菌体热休克，细胞膜的液晶结构发生扰动，出现间隙。热激后迅速转移到冰上可以促使质粒DNA转移进入胞内。
楼上有人说热激使细胞壁扩张，我不敢苟同。
所以，我觉得，不大可能成功。
不过毕竟是革兰氏阴性菌，细胞膜还不是密不透风的，运气好的话，还是可能转化成功的。
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6楼2012-06-04 14:20:00
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wyz4626

银虫 (小有名气)
wyz4626: 回帖置顶 2012-06-04 20:23:54
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-04 14:20:00
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形 ...

其实当时我想重做的，但为了验证能否不热激转化，走完了全过程。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序
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10楼2012-06-04 20:20:08
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547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-04 18:57:45
大肠杆菌转质粒是可以的,王立良<<冷冻复苏法高效转化大肠杆菌>>直接加质粒混匀后-80度冻了就涂板,武汉大学沈萍有研究自然转化,快速法直接涂37度预热平板,这些都没有经过热激的,具体很久以前看的,可能有出入.

[ Last edited by 547star on 2012-6-4 at 17:19 ]
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为什么
9楼2012-06-04 17:12:05
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普通回帖

beer胖

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
估计，很难
尤其是前一步骤是在冰上的，热击就是为了让细胞壁扩张，方便外源基因进入。
不过可以做做试，看结果怎样，也是一种实验经历。
祝成功！
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2楼2012-06-04 09:48:28
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ilxly

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如过转质粒扩增的话肯定没问题 如果转的是连接产物估计就悬了
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3楼2012-06-04 10:37:15
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江流儿

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同意楼上
出来结果跟大家分享一下啊~~~
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4楼2012-06-04 11:08:55
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xudabin98

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不热激完全可以转化成功的，你在冰上放置一会，然后42度热激，其实常温下就可以了，42度只是最优化条件。当然你的感受态效价一定要高。
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5楼2012-06-04 11:20:34
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苹果男

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-04 14:20:00
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形 ...

恩。。做这么多次转化，真的还没有仔细查过热激的原理，借LZ宝地多谢6楼了
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7楼2012-06-04 14:41:44
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 苹果男 at 2012-06-04 14:41:44
恩。。做这么多次转化，真的还没有仔细查过热激的原理，借LZ宝地多谢6楼了...

客气了，互相交流。
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8楼2012-06-04 15:55:24
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