应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 不热激，可否转化？
241/3返回列表123下一页
查看: 6765  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

wyz4626

银虫 (小有名气)

[交流] 不热激，可否转化？ 已有14人参与

昨天转化前，一走神，忘了热激就摇上了。我一咬牙继续做了，不知能否长出来？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-06-04 08:23:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有2个 )

dshlove

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 专业，我也学习了 2012-06-04 16:31:36
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物，黏附在胞膜的外表面；42 ℃热激处理，菌体热休克，细胞膜的液晶结构发生扰动，出现间隙。热激后迅速转移到冰上可以促使质粒DNA转移进入胞内。
楼上有人说热激使细胞壁扩张，我不敢苟同。
所以，我觉得，不大可能成功。
不过毕竟是革兰氏阴性菌，细胞膜还不是密不透风的，运气好的话，还是可能转化成功的。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-06-04 14:20:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wyz4626

银虫 (小有名气)
wyz4626: 回帖置顶 2012-06-04 20:23:54
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-04 14:20:00
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形 ...

其实当时我想重做的，但为了验证能否不热激转化，走完了全过程。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-06-04 20:20:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-06-04 18:57:45
大肠杆菌转质粒是可以的,王立良<<冷冻复苏法高效转化大肠杆菌>>直接加质粒混匀后-80度冻了就涂板,武汉大学沈萍有研究自然转化,快速法直接涂37度预热平板,这些都没有经过热激的,具体很久以前看的,可能有出入.

[ Last edited by 547star on 2012-6-4 at 17:19 ]
赞一下(1人) 回复此楼
为什么
9楼2012-06-04 17:12:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

beer胖

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
估计，很难
尤其是前一步骤是在冰上的，热击就是为了让细胞壁扩张，方便外源基因进入。
不过可以做做试，看结果怎样，也是一种实验经历。
祝成功！
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-04 09:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ilxly

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如过转质粒扩增的话肯定没问题 如果转的是连接产物估计就悬了
赞一下 回复此楼
3楼2012-06-04 10:37:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江流儿

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
同意楼上
出来结果跟大家分享一下啊~~~
赞一下 回复此楼
4楼2012-06-04 11:08:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xudabin98

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不热激完全可以转化成功的，你在冰上放置一会，然后42度热激，其实常温下就可以了，42度只是最优化条件。当然你的感受态效价一定要高。
赞一下 回复此楼
5楼2012-06-04 11:20:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

苹果男

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-04 14:20:00
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形 ...

恩。。做这么多次转化，真的还没有仔细查过热激的原理，借LZ宝地多谢6楼了
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-04 14:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 苹果男 at 2012-06-04 14:41:44
恩。。做这么多次转化，真的还没有仔细查过热激的原理，借LZ宝地多谢6楼了...

客气了，互相交流。
回复此楼
8楼2012-06-04 15:55:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wyz4626 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:47 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 5lbyq5wrhb 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:46 by vs90ilomwc
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 5/250 2026-02-08 08:32 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +3 3rkserf6qr 2026-02-07 4/200 2026-02-08 08:27 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:26 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +5 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:12 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 6/300 2026-02-08 08:07 by vs90ilomwc
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 08:06 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 7/350 2026-02-08 07:52 by vs90ilomwc
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:32 by vs90ilomwc
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:26 by vs90ilomwc
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全 +4 2h7du0nuhk 2026-02-07 8/400 2026-02-08 07:07 by vs90ilomwc
[硕博家园] 博士延得我，科研能力直往上蹿 +8 偏振片 2026-02-02 8/400 2026-02-08 06:52 by liyeqik
[教师之家] 有院领导为了换新车，用横向课题经费买了俩车 +7 瞬息宇宙 2026-02-04 7/350 2026-02-07 21:47 by tfang
[有机交流] 酰胺脱乙酰基 10+5 chibby 2026-02-03 12/600 2026-02-07 19:29 by 江东闲人
[基金申请] 同年申请2项不同项目，第1个项目里不写第2个项目的信息，可以吗 +4 hitsdu 2026-02-06 4/200 2026-02-07 13:07 by jurkat.1640
[基金申请] 有时候真觉得大城市人没有县城人甚至个体户幸福 +9 苏东坡二世 2026-02-04 10/500 2026-02-07 12:37 by 小毛球
[考博] 天津大学招2026.09的博士生，欢迎大家推荐交流（博导是本人） +4 a793625982 2026-02-05 5/250 2026-02-07 10:57 by a793625982
[公派出国] CSC & MSCA 博洛尼亚大学能源材料课题组博士/博士后招生｜MSCA经费充足、排名优 +4 雨念 2026-02-01 6/300 2026-02-06 23:32 by MelissaPon
[教师之家] 遇见不省心的家人很难过 +18 otani 2026-02-03 22/1100 2026-02-04 11:06 by tangmnt
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭