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【求助/交流】转化时42度热激时间？ 已有7人参与
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绝大多数都是42度90秒？ 问题一：为啥是42度？为啥是90秒？ 问题二：有些说明说说45秒，比如pMD18Simple载体 以前我都是90秒，这次90秒不长菌，和热激时间有关吗？ 请高人指点。 非常感谢！！! |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):酱紫啊~ 2010-07-18 20:45:26
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scelab(金币+5):酱紫啊~ 2010-07-18 20:45:26
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不能说完全没有关系~~ 首先氯化钙法制备的感受态，确实，DNA首先附在细胞壁上，然后经过温度反应使得DNA能够进入。但是细菌是存在核酸酶系统的，这样保证在天然的转化过程中不会吸错DNA。异源的DNA会被内源性的核酸酶给搞掉，包括各种各样的外切酶和内切酶。所以有人是猜测必须先在热情况下使得内源性的蛋白功能丧失然后才能顺利转化。当然，如果拿来煮，酶活性自然挂掉，但是菌也会死，蛋白都变形了。那么就需要一种温和的机制，既能使酶活受到剧烈影响，又能在复温后恢复。这时候就需要HSP家族的帮忙来使得热激之后的重折叠得以实现。 当然一切只是猜测，目前关于大肠杆菌人工转化的原理还不清楚。我个人是反对纯物理理论的。因为有的感受态是不需要热激都能转化的……37℃也能自然摄取，不知道是突变了什么东西，没去查文献。 [ Last edited by 三磷酸腺苷 on 2010-7-18 at 18:41 ] |
7楼2010-07-18 18:38:57
cnlics
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