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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】转化时42度热激时间？
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tian1203

银虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】转化时42度热激时间？ 已有7人参与

绝大多数都是42度90秒？
问题一：为啥是42度？为啥是90秒？
问题二：有些说明说说45秒，比如pMD18Simple载体
以前我都是90秒，这次90秒不长菌，和热激时间有关吗？
请高人指点。
非常感谢！！!
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别紧张，我不是什么好人...
1楼 2010-07-18 15:27:58
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
看天(金币+2):热心的ATP 我过几天要评选你 好吗 2010-07-18 15:48:27
看天(金币+2):热心的ATP 我过几天要评选你 好吗 2010-07-18 15:48:48
1、这个温度很适合HSP表达和起作用，当然由于热传导效率的差异，其实42~45都有人做。当然热激温度还得考虑对感受态生存的影响。42度只能说是经验。包括时间也是如此，可以调整。大的质粒可以热激久一些。通常60~90s足够了
2、同1
3、不长菌你先做个阳性对照吧~排查
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2楼2010-07-18 15:34:26
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tian1203

银虫 (著名写手)
非常感谢！
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别紧张，我不是什么好人...
3楼2010-07-18 15:47:39
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看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking:热心的ATP 我过几天要评选你 好吗 什么意思？ 2010-07-18 17:41:24
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-18 15:34:26:
1、这个温度很适合HSP表达和起作用，当然由于热传导效率的差异，其实42~45都有人做。当然热激温度还得考虑对感受态生存的影响。42度只能说是经验。包括时间也是如此，可以调整。大的质粒可以热激久一些。通常60~9 ...

有延迟 竟然重复评了
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
4楼2010-07-18 15:50:00
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看天

木虫 (知名作家)
amisking:你发了两次贴，看来网速不行。尽量少点发布。 2010-07-18 17:41:43
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2010-07-18 15:34:26:
1、这个温度很适合HSP表达和起作用，当然由于热传导效率的差异，其实42~45都有人做。当然热激温度还得考虑对感受态生存的影响。42度只能说是经验。包括时间也是如此，可以调整。大的质粒可以热激久一些。通常60~9 ...

有延迟 竟然重复评了
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
5楼2010-07-18 15:50:22
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seahow

木虫 (著名写手)
★ ★
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amisking(金币+1):鼓励一个！ 2010-07-18 17:41:50
我一般50秒足够了，和热激蛋白没有关系；
只是细胞的一种物理收缩而已，把DNA更容易进去一些； 如果楼主的质粒容易转化，不加热也可以长出来，呵呵。。。
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6楼2010-07-18 17:02:04
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+5):酱紫啊~ 2010-07-18 20:45:26
不能说完全没有关系~~
首先氯化钙法制备的感受态，确实，DNA首先附在细胞壁上，然后经过温度反应使得DNA能够进入。但是细菌是存在核酸酶系统的，这样保证在天然的转化过程中不会吸错DNA。异源的DNA会被内源性的核酸酶给搞掉，包括各种各样的外切酶和内切酶。所以有人是猜测必须先在热情况下使得内源性的蛋白功能丧失然后才能顺利转化。当然，如果拿来煮，酶活性自然挂掉，但是菌也会死，蛋白都变形了。那么就需要一种温和的机制，既能使酶活受到剧烈影响，又能在复温后恢复。这时候就需要HSP家族的帮忙来使得热激之后的重折叠得以实现。
当然一切只是猜测，目前关于大肠杆菌人工转化的原理还不清楚。我个人是反对纯物理理论的。因为有的感受态是不需要热激都能转化的……37℃也能自然摄取，不知道是突变了什么东西，没去查文献。

[ Last edited by 三磷酸腺苷 on 2010-7-18 at 18:41 ]
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7楼2010-07-18 18:38:57
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cnlics

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
别过分迷信热激。你不热激得到的结果可能一点也不差。
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8楼2010-07-18 19:20:01
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tian1203

银虫 (著名写手)
非常感谢各位大侠的帮助！
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别紧张，我不是什么好人...
9楼2010-07-18 22:27:31
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半夏无毒

铁虫 (小有名气)
★
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一般都是90秒~~或是120秒

条件允许的话，可以多试试
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10楼2010-07-18 23:37:04
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