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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 不热激，可否转化？
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wyz4626

银虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by beer胖 at 2012-06-04 09:48:28
估计，很难
尤其是前一步骤是在冰上的，热击就是为了让细胞壁扩张，方便外源基因进入。
不过可以做做试，看结果怎样，也是一种实验经历。
祝成功！

其实当时我想重做的，但为了验证能否不热激转化，走完了全过程。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序
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11楼2012-06-04 20:20:20
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wyz4626

银虫 (小有名气)
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3楼: Originally posted by ilxly at 2012-06-04 10:37:15
如过转质粒扩增的话肯定没问题 如果转的是连接产物估计就悬了

连接产物，1-5k不等。
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12楼2012-06-04 20:20:51
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wyz4626

银虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by 江流儿 at 2012-06-04 11:08:55
同意楼上
出来结果跟大家分享一下啊~~~

其实当时我想重做的，但为了验证能否不热激转化，走完了全过程。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序
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13楼2012-06-04 20:21:02
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wyz4626

银虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by xudabin98 at 2012-06-04 11:20:34
不热激完全可以转化成功的，你在冰上放置一会，然后42度热激，其实常温下就可以了，42度只是最优化条件。当然你的感受态效价一定要高。

高手！还真可以。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序
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14楼2012-06-04 20:21:37
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wyz4626

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 547star at 2012-06-04 17:12:05
大肠杆菌转质粒是可以的,王立良<<冷冻复苏法高效转化大肠杆菌>>直接加质粒混匀后-80度冻了就涂板,武汉大学沈萍有研究自然转化,快速法直接涂37度预热平板,这些都没有经过热激的,具体很久以前看的,可能有 ...

其实当时我想重做的，但为了验证能否不热激转化，走完了全过程。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序
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15楼2012-06-04 20:22:42
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wyz4626

银虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-04 14:20:00
你首先要明白热激的原理。
在0 ℃的CaCl2 低渗溶液中，细菌细胞发生膨胀， Ca 2＋使细胞膜磷脂层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中部分核酸酶解离，诱导形成感受态。此外，Ca 2＋ 能与加入的DNA分子结合，形 ...

原理是这样，可有人去验证过没。这次试验后，我才知道，不热激也可以的
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16楼2012-06-04 20:25:10
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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16楼: Originally posted by wyz4626 at 2012-06-04 20:25:10
原理是这样，可有人去验证过没。这次试验后，我才知道，不热激也可以的...

我有同学也试过，情况与你一模一样，不过她的结果是不热激转化率似乎会差些。
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17楼2012-06-04 20:49:56
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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10楼: Originally posted by wyz4626 at 2012-06-04 20:20:08
其实当时我想重做的，但为了验证能否不热激转化，走完了全过程。
很意外，不仅可以转化，而且转化效率比热激还好。4个板共挑了32个菌，只有一个是假阳性。已送测序...

那是最好的结果了，理论只是理论，目的达到了就好
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18楼2012-06-04 22:09:08
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504775490

金虫 (知名作家)
学习了....
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19楼2012-06-05 20:34:33
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zhixuec
引用回帖:
18楼: Originally posted by dshlove at 2012-06-04 22:09:08
那是最好的结果了，理论只是理论，目的达到了就好...

20楼2012-06-06 23:03:43
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