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[求助]
跪求帮忙设计个荧光定量PCR的引物
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求大哥、大姐、大叔、大婶帮个忙啊，我自己设计了一天也没找到好的 ，后面做荧光定量呢？希望既能授之以鱼，又能授之以渔（比较好的渔  ）。 |
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2013-07-05 17:40:26, 8.03 K
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7楼2013-11-19 09:02:18
2楼2013-07-06 15:41:09
西瓜
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这种事情都是自己做的啦。 什么条件都不说，就扔了一堆字母上来，有点懒了吧。这样别人也帮不了你啊。 最最最关键的是，楼主不是MM  So，骚年，自力更生吧  荧光定量PCR引物设计跟普通PCR差不多，特殊要求你可以看看takara的一个产品说明书，第10页的引物设计说明： http://www.takara.com.cn/explain/F/DRR066A.pdf |
3楼2013-07-06 17:44:54
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
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1. 先确定序列的种属： NCBI blast显示是鸡的acetyl-CoA carboxylase beta (ACACB), mRNA序列  2. 查找鸡的ACACB基因的基因组序列（有几个网站都可以下载，NCBI，UCSC，Ensembl），因为qRCR引物需要跨内含子设计以避免基因组DNA污染的影响 3. 设计引物： 遵循引物设计一般原则：  找到这样一对引物（下划线序列）： 红色为外显子，小写字母为内含子序列  Forward primer:TGACTTCCTACACTCACTGGAG (5'--3') Reverse primer:TGACATACGTGGTCAAGGACTG (5'--3') 产物长度为：137bp 基因组序列长度为：1208bp 4. 二聚体分析(oligo软件) 同源异源二聚体情况都在可接受的范围之内    5. NCBI primer blast 检验特异性 先看看mRNA的错配情况：   再看看基因组的错配情况：   |
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