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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助 细菌 10倍梯度稀释 平板该涂多少稀释液啊？
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tangmincui

新虫 (小有名气)

[求助] 求助 细菌 10倍梯度稀释 平板该涂多少稀释液啊？

求助呀！我稀释到 10*-9，每个平板涂30ul，不知道能长不？
要是做梯度稀释，平板该涂多少?有规定吗？谢谢指点！
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1楼 2013-07-02 22:58:02
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by tangmincui at 2013-07-03 00:31:25
我没测OD值，，因为我想获得单菌落，我想进行菌种鉴定，不知道这么做可以吗？谢谢你啊！...

菌种鉴定需要对活菌含量进行测定吗？

生理生化法鉴定的话貌似需要接菌培养，观察颜色、产气等现象；

分子生物学方法是通过提取DNA进行测序，将序列与NCBI中标准菌株进行对比看同源性

如果要获得单菌落，不应该用涂布法，而是采用平板划线法
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IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
8楼2013-07-03 09:00:20
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
如果目的是挑取单克隆做鉴定，划线比涂布要好些。
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21楼2013-09-12 19:57:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tangmincui: 金币+5 2013-07-03 14:11:10
估计克隆数目不会多。不知道你的菌液OD是多少，一般的菌液的浓度是10的8次方数量级的。涂多少要看你的平板大小，我一般用10cm直径的板子是涂100μl。
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2楼2013-07-03 00:11:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by tangmincui at 2013-07-03 00:54:54
梯度稀释，和稀释涂布，不一样吗？我是将菌液用无菌水稀释，然后涂的。新手新手，谢谢解答！...

一样的，不过我一般用LB稀释，感觉对菌好一点。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

tangmincui
6楼2013-07-03 01:54:54
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是用无菌水稀释，然后用100uL涂布，取哪个浓度根据母液浓度来定，开始不确定的话，先多涂几个浓度，看长出来的情况，以后根据这个情况，选择合适的两三个浓度涂，比较保险，因为每个人做的菌液浓度都可能不一样
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7楼2013-07-03 08:13:01
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weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
每个平板100微升，这是国家标准上说的额。
涂板计数要选择三个合适的稀释度，每个稀释度涂三个平板。你稀释到 10*-9，可以选择 10*-9， 10*-8， 10*-7，三个稀释度进行涂板
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10楼2013-07-03 10:34:35
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)
用无菌生理盐水或者磷酸缓冲液稀释，取1 ml涂板或者混菌，刚从实验室做了回来
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但行好事，莫问前程
14楼2013-07-03 17:12:16
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普通回帖

tangmincui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 00:11:54
估计克隆数目不会多。不知道你的菌液OD是多少，一般的菌液的浓度是10的8次方数量级的。涂多少要看你的平板大小，我一般用10cm直径的板子是涂100μl。

我没测OD值，，因为我想获得单菌落，我想进行菌种鉴定，不知道这么做可以吗？谢谢你啊！
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3楼2013-07-03 00:31:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by tangmincui at 2013-07-03 00:31:25
我没测OD值，，因为我想获得单菌落，我想进行菌种鉴定，不知道这么做可以吗？谢谢你啊！...

用稀释涂布的办法是可以得到单菌落的，一般用梯度稀释，一个平板上有几十到一百个菌落比较合适。
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4楼2013-07-03 00:35:22
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tangmincui

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 00:35:22
用稀释涂布的办法是可以得到单菌落的，一般用梯度稀释，一个平板上有几十到一百个菌落比较合适。...

梯度稀释，和稀释涂布，不一样吗？我是将菌液用无菌水稀释，然后涂的。新手新手，谢谢解答！
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5楼2013-07-03 00:54:54
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tangmincui

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 01:54:54
一样的，不过我一般用LB稀释，感觉对菌好一点。...

谢啦！
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9楼2013-07-03 09:01:02
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