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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 霉菌25度培养3天未见萌发
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guanyongyu

银虫 (小有名气)

[求助] 霉菌25度培养3天未见萌发

Sample Text
最近在做豆制品霉菌分类，出现的情况是：
虎红琼脂、PDA添加庆大霉素，培养3天后，未见萌发。同时，对比我做了实验室微生物沉降实验的虎红琼脂上萌发良好。是培养时间不够呢？还是梯度稀释涂布的时候出了问题呢？还是取样配置菌悬液时出现问题呢？
PS.菌悬液配置方法：取发霉样品于灭菌试管中，用无菌水提取1小时。再进行梯度稀释。
请各位帮帮忙哈。
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guanyongyu

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1楼2011-07-16 14:45:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

springTT

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

guanyongyu(金币+3): 感谢 2011-07-16 16:11:01
amisking(EPI+1): 鼓励应助 2011-07-16 20:31:40
个人认为：
1、霉菌的最适生长温度范围是28℃-30℃；生长时间至少3d以上。
2、不明白楼主用无菌水处理样品为什么要处理1h；如果有孢子生长，那用无菌水冲一下基本上就会将孢子洗下来；
3、低稀释度的菌悬液也要进行涂布，毕竟不清楚到底有多少孢子；或者提前计数也可以。
个人实验的感觉，仅供参考。
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3楼2011-07-16 16:03:36
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+6, EPI+1): 谢谢交流 2011-07-17 10:16:58
引用回帖:
Originally posted by springTT at 2011-07-16 16:03:36:
个人认为：
1、霉菌的最适生长温度范围是28℃-30℃；生长时间至少3d以上。
2、不明白楼主用无菌水处理样品为什么要处理1h；如果有孢子生长，那用无菌水冲一下基本上就会将孢子洗下来；
3、低稀释度的菌悬液也要 ...

我来回答你的问题

1、霉菌的最适生长温度你说得不错，但是在25度下也是可以生长的，而且生长速度不一定会比28度差多少。菌丝发达的霉菌例如草酸青霉和黑曲霉，只要2天就能形成菌落，不需要3天。如果是3天，那么孢子都已经长出来了，已经完成了一个无性繁殖世代。如果是毛霉，生长3天可能菌丝都已经顶到平板盖子了。

2、用溶液来浸泡含有微生物的样品，目的是把微生物尽可能多地释放出来，我为了得到更多更全面的微生物，还会放到摇床里摇，甚至用磁力搅拌器。用无菌水冲一下是不能得到多少微生物的。

3、土壤里的微生物数量是很难确定的，土壤的多样性很多，含有微生物的数量各有不同，所以我赞成低稀释度的稀释液也要涂板。孢子计数很难实施，因为土壤成分复杂，有杂质污染，如菌丝、细菌、酵母和固体不溶物，会干扰血球计数板计数。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2011-07-17 02:08:10
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普通回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

guanyongyu(金币+1): 谢谢啦 2011-07-16 16:10:48
会不会是菌悬液的稀释度太大，楼主做了哪些稀释度，低稀释度的菌悬液涂板了吗？
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2楼2011-07-16 15:03:45
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guanyongyu

银虫 (小有名气)
稀释的悬液从10-1~10-8.涂布是从10-5~10-8.第一次做，悬液泡了1H，而后都是15min。谢谢楼上两位。
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4楼2011-07-16 16:10:21
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

guanyongyu(金币+1): 谢谢指导~ 2011-07-16 22:09:04
引用回帖:
Originally posted by guanyongyu at 2011-07-16 16:10:21:
稀释的悬液从10-1~10-8.涂布是从10-5~10-8.第一次做，悬液泡了1H，而后都是15min。谢谢楼上两位。

很可能是孢子悬液的稀释度太高，可以同时做一个低稀释度的涂布平板。同时培养时间稍微长一点观察一下！
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5楼2011-07-16 17:06:09
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guanyongyu

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
谢谢楼上。么得悬赏啦，送朵红花。
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7楼2011-07-17 09:57:10
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springTT

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-17 02:08:10:
我来回答你的问题

1、霉菌的最适生长温度你说得不错，但是在25度下也是可以生长的，而且生长速度不一定会比28度差多少。菌丝发达的霉菌例如草酸青霉和黑曲霉，只要2天就能形成菌落，不需要3天。如果是3天， ...

嗯，谢谢！我也只是根据我的实验的经验说的，如有不妥，望指点！
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8楼2011-07-17 10:07:47
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
Originally posted by springTT at 2011-07-17 10:07:47:
嗯，谢谢！我也只是根据我的实验的经验说的，如有不妥，望指点！

我的看法大概就是那么多了
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-07-17 14:45:40
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pengyou朋友

铜虫 (正式写手)
你可以先做做镜检，显微镜下形态分生孢子情况如何，然后看看你培养的条件，及做稀释时又没加to-80？庆大霉素可以换下其他的，小小意见而已，有什么同意见请各位虫友指教！
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昂首走路，方向只要是对的就不怕远
10楼2011-07-18 11:44:45
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