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tangmincui

新虫 (小有名气)

[求助] 求助 细菌 10倍梯度稀释 平板该涂多少稀释液啊?

求助呀!我稀释到 10*-9,每个平板涂30ul,不知道能长不?
要是做梯度稀释,平板该涂多少?有规定吗?谢谢指点!
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by tangmincui at 2013-07-03 00:31:25
我没测OD值,,因为我想获得单菌落,我想进行菌种鉴定,不知道这么做可以吗?谢谢你啊!...

菌种鉴定需要对活菌含量进行测定吗?

生理生化法鉴定的话貌似需要接菌培养,观察颜色、产气等现象;

分子生物学方法是通过提取DNA进行测序,将序列与NCBI中标准菌株进行对比看同源性

如果要获得单菌落,不应该用涂布法,而是采用平板划线法
IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
8楼2013-07-03 09:00:20
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

如果目的是挑取单克隆做鉴定,划线比涂布要好些。
21楼2013-09-12 19:57:21
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tangmincui: 金币+5 2013-07-03 14:11:10
估计克隆数目不会多。不知道你的菌液OD是多少,一般的菌液的浓度是10的8次方数量级的。涂多少要看你的平板大小,我一般用10cm直径的板子是涂100μl。
2楼2013-07-03 00:11:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by tangmincui at 2013-07-03 00:54:54
梯度稀释,和稀释涂布,不一样吗?我是将菌液用无菌水稀释,然后涂的。新手新手,谢谢解答!...

一样的,不过我一般用LB稀释,感觉对菌好一点。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2013-07-03 01:54:54
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wzq_ing

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是用无菌水稀释,然后用100uL涂布,取哪个浓度根据母液浓度来定,开始不确定的话,先多涂几个浓度,看长出来的情况,以后根据这个情况,选择合适的两三个浓度涂,比较保险,因为每个人做的菌液浓度都可能不一样
7楼2013-07-03 08:13:01
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weiyasong

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
每个平板100微升,这是国家标准上说的额。
涂板计数要选择三个合适的稀释度,每个稀释度涂三个平板。你稀释到 10*-9,可以选择 10*-9, 10*-8, 10*-7,三个稀释度进行涂板
10楼2013-07-03 10:34:35
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20093651

铁杆木虫 (职业作家)

用无菌生理盐水或者磷酸缓冲液稀释,取1 ml涂板或者混菌,刚从实验室做了回来
但行好事,莫问前程
14楼2013-07-03 17:12:16
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普通回帖

tangmincui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 00:11:54
估计克隆数目不会多。不知道你的菌液OD是多少,一般的菌液的浓度是10的8次方数量级的。涂多少要看你的平板大小,我一般用10cm直径的板子是涂100μl。

我没测OD值,,因为我想获得单菌落,我想进行菌种鉴定,不知道这么做可以吗?谢谢你啊!
3楼2013-07-03 00:31:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by tangmincui at 2013-07-03 00:31:25
我没测OD值,,因为我想获得单菌落,我想进行菌种鉴定,不知道这么做可以吗?谢谢你啊!...

用稀释涂布的办法是可以得到单菌落的,一般用梯度稀释,一个平板上有几十到一百个菌落比较合适。
4楼2013-07-03 00:35:22
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tangmincui

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 00:35:22
用稀释涂布的办法是可以得到单菌落的,一般用梯度稀释,一个平板上有几十到一百个菌落比较合适。...

梯度稀释,和稀释涂布,不一样吗?我是将菌液用无菌水稀释,然后涂的。新手新手,谢谢解答!
5楼2013-07-03 00:54:54
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tangmincui

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-03 01:54:54
一样的,不过我一般用LB稀释,感觉对菌好一点。...

谢啦!
9楼2013-07-03 09:01:02
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