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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 稀释梯度倒平板前镜鉴
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ckenter

铁虫 (小有名气)

[求助] 稀释梯度倒平板前镜鉴

为了能少做一些平板 导师说在倒平板前对稀释梯度做镜鉴 看从哪个梯度开始做比较好 现在我不知道怎么镜鉴 求大虫们帮忙啊 我是微生物的菜鸟 希望能指导一下我 我做的是泡菜中微生物的分离
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1楼 2013-05-06 15:47:31
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carrieskl

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-05-07 20:34:37
其实你可以查查文献，你的那株菌不同浓度时的OD值，然后测OD就能大概估一下了。。。
如果一直用这株菌完全可以趁不忙的时候倒些平板做个活菌数-OD的标准曲线，后续实验都可以省很多事儿，毕竟每次都涂片计数太麻烦了。。。。你又看不出哪个是活的哪个是死的，只能得到个总菌数。
以大肠杆菌为例说个镜检计数的方法
------
直接涂片计数法。用测微器测出油镜的视野半径γ, 然后计算视野的面积。
涂片的制作:
以灭菌微量吸管吸取充分混合的被测菌液0.01ml,滴加于清洁的划有100mm2方格的载玻片上。将玻片标本固定,以碱性美蓝染色5min,水洗干燥后即可镜检。
镜检和计数:
将涂片置于已测知视野面积的油镜下观察,检查x个视野(按菌数决定),计算每个视野中所见的细菌数,假设其总数为n,则平均每视野具有n/x个细菌,故1ml被检菌液中的细菌总数=100×100mm2 πr2×nx
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争做医生中最好的厨子
2楼2013-05-07 16:01:53
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ckenter

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by carrieskl at 2013-05-07 16:01:53
其实你可以查查文献，你的那株菌不同浓度时的OD值，然后测OD就能大概估一下了。。。
如果一直用这株菌完全可以趁不忙的时候倒些平板做个活菌数-OD的标准曲线，后续实验都可以省很多事儿，毕竟每次都涂片计数太麻烦 ...

谢谢你的耐心回答 但是我觉得我还是不怎么懂 我是从泡菜中分离微生物 不是分离某一株 而是看有哪些微生物 也就是说要做四种基本的培养基然后一步一步分离  可能最后会分离出几十柱菌的 现在还是最初步的 请问你知不知道怎么从泡菜制作菌悬液
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3楼2013-05-07 16:47:06
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carrieskl

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

蘸一些泡菜汁（或者提取物，比如捣碎了融在生理盐水里然后取上清），划线（不同培养基都画），得到一大堆单菌落，然后根据菌落形态，每种挑几个分别接到液体里，再划线（或者稀释涂布）看看菌落形态是不是统一，统一的话基本可以认为挑的时候没有污染。。然后染色镜检，形态学鉴定，提DNA，分子生物学鉴定。。。基本是这样过程吧
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争做医生中最好的厨子
4楼2013-05-07 17:00:58
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ckenter

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by carrieskl at 2013-05-07 17:00:58
蘸一些泡菜汁（或者提取物，比如捣碎了融在生理盐水里然后取上清），划线（不同培养基都画），得到一大堆单菌落，然后根据菌落形态，每种挑几个分别接到液体里，再划线（或者稀释涂布）看看菌落形态是不是统一，统一 ...

我现在就在想 因为我的泡菜是干的 所以只能贱碎放在生理盐水里面 但是我想问 称取5g泡菜 在哪里称啊？是不是要染上杂菌呢？
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5楼2013-05-08 16:21:00
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carrieskl

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by ckenter at 2013-05-08 16:21:00
我现在就在想 因为我的泡菜是干的 所以只能贱碎放在生理盐水里面 但是我想问 称取5g泡菜 在哪里称啊？是不是要染上杂菌呢？...

泡菜制作时候就是暴露在空气中的 称的话也没必要完全不暴露在空气里啊
称的话就用干净的容器就成了 比如拿个小烧杯灭菌之后称。。
并且我觉得，如果你只是想知道它里面有什么菌的话，没必要定量非得多少克泡菜，够用不就成了么
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争做医生中最好的厨子
6楼2013-05-08 16:26:14
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ckenter

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by carrieskl at 2013-05-08 16:26:14
泡菜制作时候就是暴露在空气中的 称的话也没必要完全不暴露在空气里啊
称的话就用干净的容器就成了 比如拿个小烧杯灭菌之后称。。
并且我觉得，如果你只是想知道它里面有什么菌的话，没必要定量非得多少克泡菜， ...

要做稀释梯度的嘛 不称的话就做不了梯度哦。。。
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7楼2013-05-09 12:13:46
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