24小时热门版块排行榜    

查看: 2182  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR的问题,痛苦!

做了一个PCR ,结果如图:10ul的体系,酶用的Phusion mix,加样5ul ,引物 20uM 0.2ul,模板1ng/ul 0.2ul,ddH2O补至10 ul。
反应条件是退火60度,延伸72 1min。  
要扩增的片段大小为2000bp。
引物为别人文献里报道的,
用了PRIMER 5.0  分析结果也在附件中,我问过了原作者,他告诉我他们扩增的没有问题。但是不知道我这哪里出了问题。作者告诉我他们用50-55退火温度都可以 ,但我做了后全是弥散带,做了梯度后发现最好就是这样了,再高的温度就没有带了。。。
希望大家帮我分析分析。
先进的同学帮助下后进的同学。
PCR的问题,痛苦!
1.png


PCR的问题,痛苦!-1
85000F2C9B404366A35CD7F31F7F1EC9.jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-1 at 07:46 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

透明的玻璃杯

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 不错 2013-07-01 07:47:08
亮的是2K吗?
作者告诉我他们用50-55退火温度都可以,反应条件是退火60度. 这一点不清楚,你试过50没有?
引物0.2ul, 有没有试过多加点?
要不再另外找家公司合成新的引物试试,反正也不贵。

我能想到的就是这些,祝好运!
皇帝诞生地
3楼2013-06-30 20:37:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

liyongliangx

铜虫 (小有名气)

作者告诉我他们用50-55退火温度都可以 ,但我做了后全是弥散带,做了梯度后发现最好就是这样了,再高的温度就没有带了。。
2楼2013-06-30 19:55:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

animbiotech

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+1, 现在酶的质量一般都很好了 2013-07-01 07:47:30
建议换另外一家Taq酶
4楼2013-06-30 22:25:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

m_marion

新虫 (小有名气)


1949stone: 金币+1, 有钱有的时候也不是好事啊 要看自身需要 最好问问楼主使用来做啥的 2013-07-01 07:48:33
引用回帖:
4楼: Originally posted by animbiotech at 2013-06-30 22:25:59
建议换另外一家Taq酶

开什么玩笑?Phusion是高保真酶,要换也是换别的高保真酶,换Taq是嫌测序经费花不掉么?
5楼2013-06-30 23:26:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +7 Lanmanbaby 2026-08-09 13/650 2026-08-09 19:04 by 天神眷顾
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 qTvzQBRAHjCi 2026-08-07 4/200 2026-08-08 17:22 by oEVWOejN9taj
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:27 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:19 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 4/200 2026-08-08 16:02 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 15:07 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 WQyTGMbfH7Cx 2026-08-07 4/200 2026-08-08 15:02 by oEVWOejN9taj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:42 by oEVWOejN9taj
[基金申请] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 4/200 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:27 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 HEQlVqMTIA7d 2026-08-07 5/250 2026-08-08 14:22 by oEVWOejN9taj
[论文投稿] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 KXLV3nuBVBY7 2026-08-07 6/300 2026-08-08 14:01 by oEVWOejN9taj
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 Vi50GxzrFcSG 2026-08-07 6/300 2026-08-08 10:19 by 3OOjAIS77qg2
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见